隨著基因編輯技術(shù)日漸成熟,基因編輯作物不斷涌現(xiàn)。本研究對(duì)PL3基因編輯水稻編輯位點(diǎn)進(jìn)行檢測(cè)研究,以期為基因編輯作物定量檢測(cè)方法提供技術(shù)支持,滿足基因編輯作物產(chǎn)品產(chǎn)業(yè)化定量標(biāo)識(shí)的需求。以PL3基因編輯水稻為研究對(duì)象,以焦磷酸測(cè)序、HRM（高分辨率溶解曲線）、雙重微滴數(shù)字PCR為分析工具,對(duì)PL3基因編輯水稻編輯位點(diǎn)進(jìn)行精準(zhǔn)定量檢測(cè)。（1）通過對(duì)PL3基因編輯型水稻編輯位點(diǎn)焦磷酸測(cè)序引物設(shè)計(jì)、引物有效性檢測(cè)、基因分型定型檢測(cè)、基因分型定量檢測(cè)、盲樣檢測(cè)等試驗(yàn),建立了PL3基因編輯水稻編輯位點(diǎn)焦磷酸測(cè)序檢測(cè)方法。（2）通過PL3基因編輯型水稻編輯位點(diǎn)HRM引物設(shè)計(jì)、引物有效性分析,反應(yīng)體系、反應(yīng)條件優(yōu)化及分型定量等試驗(yàn),確定了HRM反應(yīng)引物濃度和退火溫度的最佳組合為0.4μmol/L和58°C,檢出限不低于10%,建立了PL3基因編輯水稻編輯位點(diǎn)HRM檢測(cè)方法。（3）通過PL3基因編輯型水稻編輯位點(diǎn)雙重?cái)?shù)字PCR引物和探針設(shè)計(jì)、反應(yīng)體系的建立、定量范圍檢測(cè)、LOQ驗(yàn)證等試驗(yàn),確定了數(shù)字PCR反應(yīng)引物濃度和探針濃度分別為0.4μmol/L和0.15μmol/L,最佳退火溫度為62.4℃,最低檢... 

【文章來源】：天津農(nóng)學(xué)院天津市

【文章頁數(shù)】：53 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

水稻DNA的內(nèi)源基因PCR擴(kuò)增結(jié)果

水稻DNA模板的測(cè)序引物PCR擴(kuò)增結(jié)果

編輯型水稻和野生型水稻DNA序列比對(duì)圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3428684