水稻是我國(guó)主要的糧農(nóng)作物,是否含有轉(zhuǎn)基因成分與糧食和食品安全息息相關(guān)。本試驗(yàn)基于出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T 2584-2010 《水稻及其產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法》設(shè)計(jì)轉(zhuǎn)基因成分花椰菜花葉病毒35S啟動(dòng)子（Promoter of cauliflower mosaicvirus 35S,p Ca MV35S）、胭脂堿合成酶基因終止子（Terminator of nopaline synthase gene,t NOS）和水稻內(nèi)源基因蔗糖磷酸合酶基因（Sucrose phosphate synthase,SPS）的引物及探針,建立水稻轉(zhuǎn)基因成分的定性檢測(cè)方法,并深入研究此方法的檢出限、定量能力以及靈敏度。結(jié)果表明:此方法具有較強(qiáng)特異性、較低檢出限（0. 1ng,1ng）以及較高靈敏度（0. 1%）,并且此方法具有較好的定量能力（擴(kuò)增效率:100%,95%;相關(guān)系數(shù)R2:0. 9874,0. 9881）。綜上所述,此方法不僅具有靈敏的定性能力還具有定量潛能。 

【文章來(lái)源】：農(nóng)業(yè)與技術(shù). 2020,40(24)

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水稻模板DNA的檢出限檢測(cè)

利用轉(zhuǎn)基因水稻模板DNA做定量標(biāo)準(zhǔn)曲線檢測(cè)轉(zhuǎn)基因成分p Ca MV35S和t NOS的含量，定量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖3。從圖中可以看出，p Ca MV35S基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=-3.306x+53.88,R2=0.9874;t NOS基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=-3.442x+53.05,R2=0.9881。通過(guò)擴(kuò)增效率計(jì)算公式E (%)=[10(-1/k)-1]×100[16]計(jì)算p Ca MV35S和t NOS基因的擴(kuò)增效率分別為100%和95%。因其擴(kuò)增效率均在90%～110%，斜率均在-3.1～-3.6,R2均>0.98，所以這兩種轉(zhuǎn)基因成分的引物和探針達(dá)到定量要求，能夠?qū)λ局械霓D(zhuǎn)基因成分進(jìn)行定量。2.4 摻假靈敏度檢測(cè)結(jié)果

通過(guò)對(duì)9種轉(zhuǎn)基因作物、非轉(zhuǎn)因水稻、水、陽(yáng)性質(zhì)粒pp Ca MV35S和pt NOS進(jìn)行水稻內(nèi)源基因SPS及轉(zhuǎn)基因成分p Ca MV35S、t NOS引物和探針的實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試驗(yàn)，檢測(cè)結(jié)果如表2和圖1所示，本試驗(yàn)以Ct值≤36為檢出判定。由表2和圖1A可知，SPS基因只在非轉(zhuǎn)基因水稻和轉(zhuǎn)基因水稻中檢出，且Ct值都<36;陽(yáng)性質(zhì)粒匹配轉(zhuǎn)基因成分的引物和探針結(jié)果見表2和圖1B、D，可以看出陽(yáng)性質(zhì)粒擴(kuò)增曲線良好，擴(kuò)增結(jié)果的Ct值分別為22.73±0.37 (pp Ca MV35S)和18.23±1.20 (pt NOS);對(duì)9種轉(zhuǎn)基因作物p Ca MV35S和t NOS基因檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)2種轉(zhuǎn)基因成分只在轉(zhuǎn)基因水稻中檢出，且Ct值分別為23.90±0.25和25.29±0.14 (圖1C、E)。以上結(jié)果說(shuō)明水稻內(nèi)源基因SPS和轉(zhuǎn)基因成分p Ca MV35S、t NOS在樣品檢測(cè)中均表現(xiàn)出良好的特異性。2.2 檢出限試驗(yàn)結(jié)果

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3423603