類胡蘿卜素裂解雙加氧酶（CCD）可催化類胡蘿卜素在特定位點氧化裂解生成多種生物活性化合物,其活性差異一定程度上決定了植物體內(nèi)類胡蘿卜素含量和組成變化。為了探討柑橘中CCD1蛋白對類胡蘿卜素積累的影響,從紅肉臍橙（Citrus sinensis L. Osbeck）果實中克隆了CCD1基因,將其特異片段通過重組反應連接到pHGRV載體中,構建CCD1的RNA干擾載體pHGRV-CCD1。利用農(nóng)桿菌介導的方法將其轉入‘國慶1號’蜜柑、‘伏令夏橙’和‘馬敘’葡萄柚愈傷組織中,經(jīng)PCR鑒定分別獲得6、4、4個轉基因干擾系。3種柑橘材料轉基因干擾系中CCD1基因的表達水平均較野生型顯著下調,其中‘馬敘’葡萄柚轉基因干擾系Rm2的表達水平僅為野生型的8.4%,干擾效果最佳。CCD1轉基因干擾系愈傷組織外觀多數(shù)呈現(xiàn)與野生型對照相近的色澤,僅Rm2系可見較為明顯的顏色變化;綜合分析3種柑橘材料轉基因前后類胡蘿卜素含量變化,發(fā)現(xiàn)CCD1基因抑制表達后,紫黃質、9–順式–紫黃質的含量均較野生型顯著增加,表明其可能是CCD1在柑橘愈傷組織體內(nèi)優(yōu)先選擇的裂解底物。 

【文章來源】：園藝學報. 2020,47(10)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

干擾載體圖示

經(jīng)過多批次遺傳轉化，共獲得‘國慶1號’蜜柑抗性愈傷系32個、‘伏令夏橙’抗性愈傷系19個以及‘馬敘’葡萄柚抗性愈傷系27個。分別提取抗性愈傷系的DNA并進行PCR鑒定，并選取來自3種材料的14份Cs CCD1干擾系，其中包括6份‘國慶1號’蜜柑、4份‘伏令夏橙’以及4份‘馬敘’葡萄柚作進一步分析。如圖2所示，以35S啟動子序列引物為左引物、CCD1反向引物為右引物進行PCR擴增，所有選取的轉基因系均擴增出1.1 kb左右的目標條帶，與CCD1干擾重組質粒的擴增產(chǎn)物大小一致，表明干擾質粒已成功轉入愈傷組織基因組中。2.2 轉基因干擾系中CCD1基因的表達水平分析

‘馬敘’葡萄柚轉基因干擾系中CCD1的表達水平與野生型和轉基因陰性對照相比均顯著下調，其中以Rm2下調最為明顯，表達水平僅為野生型8.4%。值得一提的是，轉基因陰性系的表達水平也顯著低于野生型，僅為野生型52.9%，表明遺傳操作本身對基因的表達水平也產(chǎn)生了一定的影響（圖3,C）。2.3 CCD1干擾系中類胡蘿卜素的積累特征

【參考文獻】：
期刊論文
[1]杏香氣形成特異基因PaCCD1的克隆與功能分析[J]. 劉盛雨,章世奎,盧娟芳,李文慧,席萬鵬.  園藝學報. 2018(03)

博士論文
[1]柑橘全基因組DNA甲基化分析及調控作用研究[D]. 徐記迪.華中農(nóng)業(yè)大學 2015

碩士論文
[1]培養(yǎng)條件對柑橘胚性愈傷組織中類胡蘿卜素合成的影響[D]. 劉寶貞.華中農(nóng)業(yè)大學 2009



本文編號：3401409