發(fā)布時(shí)間：2021-08-30 22:29

　　背景:鼠雙微粒體基因（murine double mimute2,MDM2）在人體腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中起重大作用。MDM2蛋白是MDM2基因的產(chǎn)物,該產(chǎn)物是P53重要的負(fù)性調(diào)節(jié)因子,MDM2-P53通路是調(diào)節(jié)細(xì)胞周期穩(wěn)定、保持基因組穩(wěn)定以及細(xì)胞凋亡的重要機(jī)制,MDM2基因過(guò)表達(dá)會(huì)使P53的活性喪失,大多數(shù)人患癌均是由于P53的缺失。P53通過(guò)預(yù)防或修復(fù)潛在的致癌損傷或消除已經(jīng)開始致癌進(jìn)展的細(xì)胞來(lái)抑制腫瘤的發(fā)生,P53調(diào)控轉(zhuǎn)錄的能力在腫瘤的形成中起著重要作用。從進(jìn)化的角度來(lái)看,人體內(nèi)的P53水平是否能夠保持平衡與其腫瘤抑制能力具有很大的關(guān)系,而P53的蛋白水平能夠通過(guò)介導(dǎo)E3泛素連接酶MDM2蛋白來(lái)調(diào)控,MDM2基因通過(guò)P53途徑來(lái)調(diào)節(jié)人體內(nèi)的P53水平或非P53依賴途徑等多種方式調(diào)節(jié)細(xì)胞的異常增殖和凋亡。因此,MDM2基因是癌癥發(fā)生的一個(gè)重要的候選基因,先前的研究發(fā)現(xiàn)其啟動(dòng)子區(qū)rs937283位點(diǎn)是一個(gè)能調(diào)控MDM2基因表達(dá)水平的單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)（single nucleotide polymorphism,SNP）,與個(gè)體對(duì)癌癥的易感性有關(guān)。鑒于此,本研究探索了MDM2基因啟動(dòng)子區(qū)r... 

【文章來(lái)源】：武漢理工大學(xué)湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：66 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

基因組DNA瓊脂糖凝膠電泳圖

20表2-3MDM2基因rs937283位點(diǎn)引物序列設(shè)計(jì)引物引物序列（5’-3’）退火溫度產(chǎn)物長(zhǎng)度酶，酶切溫度酶切片段長(zhǎng)度正義鏈5’-GCGACCCCTCTGACCGA-3’60℃175bpAvaⅡ37℃A等位基因:175bp反義鏈5’-CCTCAAGACTCCCCAGTTTC-3’G等位基因：107bp+68bp2.4.3PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果圖2-2PCR產(chǎn)物的瓊脂糖凝膠電泳圖我們對(duì)設(shè)計(jì)出來(lái)的MDM2基因rs937283位點(diǎn)的引物進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，并對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)，根據(jù)電泳結(jié)果，我們可以看到，引物的條帶單一并且明亮沒(méi)有雜帶，我們?cè)O(shè)計(jì)的產(chǎn)物實(shí)際長(zhǎng)度是175bp，在凝膠電泳圖中顯示接近200bp，實(shí)驗(yàn)結(jié)果驗(yàn)證了引物設(shè)計(jì)的正確性。2.4.4PCR產(chǎn)物酶切分型我們采用PCR-RFLP分型技術(shù)進(jìn)行了酶切分型，對(duì)擴(kuò)增成功的產(chǎn)物進(jìn)行了酶切實(shí)驗(yàn)，按著要求將酶切體系配置完成后加入到PCR產(chǎn)物中，然后放在水浴鍋中進(jìn)行孵育，隔日進(jìn)行跑膠獲取分型數(shù)據(jù)。

21圖2-3PCR產(chǎn)物酶切分型根據(jù)PCR酶切片段長(zhǎng)度：A等位基因長(zhǎng)度在175bp，G等位基因長(zhǎng)度在107bp和68bp，所以瓊脂糖凝膠電泳圖中的AA基因型有一條明亮的帶，條帶的長(zhǎng)度為175bp；基因型AG有三條電泳條帶，條帶的長(zhǎng)度分別為68bp、107bp、175bp；基因型GG有兩條電泳條帶，條帶的長(zhǎng)度分別為68bp和107bp，從而可以根據(jù)產(chǎn)物酶切分型圖讀出三種基因型GG、AG、AA，然后對(duì)酶切分型結(jié)果進(jìn)行整理，統(tǒng)計(jì)出三種基因型的數(shù)量，為后續(xù)的生物統(tǒng)計(jì)學(xué)分析做出工作。2.4.5分型基因的生物學(xué)分析統(tǒng)計(jì)方法根據(jù)瓊脂糖凝膠電泳對(duì)應(yīng)的酶切片段長(zhǎng)度讀出基因型，統(tǒng)計(jì)出正常組和癌癥組的基因型（GG、AG、AA）數(shù)量，然后計(jì)算出兩組對(duì)應(yīng)的等位基因數(shù)量，將基因型和等位基因的數(shù)量匯總整理成數(shù)據(jù)表。建立六種基因模型（Gvs.A;GGvs.AA;AGvs.AA;GGvs.AG;GG+AGvs.AA;GGvs.AG+AA），用生物分析軟件STATA14.0進(jìn)行邏輯回歸分析，根據(jù)邏輯回歸分析中的突變位點(diǎn)致病風(fēng)險(xiǎn)（oddratio,OR）值、95%置信區(qū)間（Confidenceinterval,CI）和顯著性差異的P值判斷MDM2基因rs937283位點(diǎn)與癌癥是否顯著相關(guān)，若OR值大于等于1，則該位點(diǎn)具有致病風(fēng)險(xiǎn)，說(shuō)明該位點(diǎn)會(huì)增加癌癥的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；若OR值小于1，則沒(méi)有致病風(fēng)險(xiǎn)。邏輯回歸分析的P值若小于0.05，說(shuō)明正常對(duì)照組與癌癥組具有極顯著差異，具有生物學(xué)統(tǒng)計(jì)意義；若P值大于0.05，說(shuō)明兩組之間沒(méi)有極顯著差異。若異質(zhì)性檢驗(yàn)中的P值小于0.1，使用隨機(jī)效應(yīng)模型計(jì)算組合OR值；若P值大于等于0.1，使用固定效應(yīng)分析模型。


本文編號(hào)：3373619