發(fā)布時(shí)間：2021-08-29 03:56

　　念珠藻葛仙米（Nostoc sphaeroides Kützing）,是久負(fù)盛名的食藥兩用藻類(lèi)。隨著經(jīng)濟(jì)、社會(huì)發(fā)展,葛仙米在抗氧化等方面的資源價(jià)值愈發(fā)凸顯。本研究以恩施地區(qū)珍稀念珠藻葛仙米為材料,采用第三代基因組測(cè)序和現(xiàn)代分子生物學(xué)等技術(shù),對(duì)葛仙米全基因組解析,克隆其藻藍(lán)蛋白（phycocyanin,PC）重要亞基的編碼基因,Ns-PC-α和Ns-PC-β,并進(jìn)行原核表達(dá),取得如下研究結(jié)果:（1）、以無(wú)污染鮮活葛仙米藻體材料,提取其總DNA,進(jìn)行基因組測(cè)序,首次獲得恩施珍稀念珠藻葛仙米的全基因組序列。其基因組包含一條染色體,四個(gè)質(zhì)粒,全長(zhǎng)約66.8兆bp;G+C%含量達(dá)41.6%;預(yù)測(cè)葛仙米基因組編碼蛋白的基因達(dá)7125個(gè),占其基因總量的98.9%。其中發(fā)現(xiàn)涉及氨基酸和維生素代謝的基因分別有254與196個(gè),包括9種人體必需氨基酸與生物素的代謝基因,這些基因是葛仙米食藥價(jià)值的重要證據(jù);（2）、設(shè)計(jì)基因特異引物,克隆葛仙米的藻藍(lán)蛋白亞基基因Ns-PC-α和Ns-PC-β.Ns-PC-α和Ns-PC-β以雙順?lè)醋有问酱嬖?Ns-PC-α位于Ns-PC-β下游。Ns-PC-α與Ns-PC-β... 

【文章來(lái)源】：湖北民族大學(xué)湖北省

【文章頁(yè)數(shù)】：69 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

葛仙米在固體培養(yǎng)基上增殖與繼代a,生殖中的葛仙米，箭頭顯示即將分裂的藻體細(xì)胞，星號(hào)(*)顯示

其中提取的樣品#S2 與#S3 總量較好，滿(mǎn)足下一步建立基因組的要求。Qubit 檢測(cè)技術(shù)是借助特殊標(biāo)記的熒光分子探針，特異性的與 DNA 分子結(jié)合，能夠盡可能避免其它有機(jī)大分子、離子的污染和干擾結(jié)果比較精確的反應(yīng)提取樣品 DNA 的質(zhì)量。結(jié)果顯示，總 DNA 樣品度最高 (表 3-1)，達(dá)到 12.0 μg.表 3-1 對(duì)提取的葛仙米總 DNA 進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)Table 3-1 Testing the extracted total DNA of Nostoc sphaeroides Kützing A260/280 A260/A230 濃度(Qubit) 體積(μL) 總量(μg ) 1.981.891.800.640.860.5832.060.283.41502001004.8012.08.3N\Y 分別表示不符合/符合繼續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

圖 3-4 葛仙米中生物素代謝Figure 3-4 Analysis the metabolism of biotin metabolismin Nostoc sphaeroides Kützing物素參與。對(duì)生物素代謝的基因進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn) 12 個(gè)主要基因與脂肪酸代謝關(guān)系密切，顯示這些基因都能定位于脂肪酸代謝通路，功能上應(yīng)較為保守(圖 3-4)。生物素，也稱(chēng)為維生素 H, 人體需要量并不高，但是其功能非同一般。生物素在細(xì)胞內(nèi)作為羧化、脫羧和脫氫反應(yīng)酶的輔助因子，對(duì)人體內(nèi)其它營(yíng)養(yǎng)成分，尤其是三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝具有重要作用，包括糖、核酸和蛋白質(zhì)的代謝[71, 72]。任何年齡段的人群，包括嬰兒，體內(nèi)如果缺乏生物素，將導(dǎo)致一些疑難疾病，包括皮炎、肝腎等方面的疾病，對(duì)人體健康影響較大[71-74]。在醫(yī)藥運(yùn)用上，維生素是重要的輔助抗氧化藥物，這些維生素代謝的基因，為葛仙米重要的抗氧化價(jià)值提供了分子證據(jù)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]市政污水微藻種類(lèi)鑒定及污水培養(yǎng)小球藻研究[D]. 劉建強(qiáng).南昌大學(xué) 2011
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