目的:使用基因甲基化芯片技術(shù),篩選出鑒別肺部良惡性腫瘤之間的基因甲基化標(biāo)志物。驗證EVX2和ZNF577基因在標(biāo)本組織及血漿中的甲基化狀態(tài),探討該基因啟動子甲基化狀態(tài)與患者的病理類型、病理分期、性別、年齡、吸煙、飲酒等之間的關(guān)系。材料與方法:本研究共收集肺部腫瘤標(biāo)本60例,其中非小細(xì)胞肺癌標(biāo)本40例,肺部良性結(jié)節(jié)標(biāo)本20例。肺癌組織標(biāo)本為實驗組,癌旁組織及肺部良性結(jié)節(jié)組織為對照組,進行如下實驗操作:（1）基因甲基化芯片測序,選定目的基因;（2）分別提取組織DNA和血漿游離DNA;（3）紫外分光光度計檢測DNA的濃度及純度,1%瓊脂糖凝膠電泳質(zhì)檢;（4）DNA標(biāo)本甲基化處理,2.5%瓊脂糖凝膠電泳對目的基因啟動子甲基化狀態(tài)進行判讀;（5）運用spss24.0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果:1.確定目的基因為EVX2和ZNF577,肺癌組織中目的基因啟動子甲基化狀態(tài)與對應(yīng)的癌旁組織及肺部良性結(jié)節(jié)組織之間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。2.肺癌血漿游離DNA中EVX2和ZNF577基因甲基化狀態(tài)與肺部良性結(jié)節(jié)血漿之間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。3.肺癌組織EVX2和ZN... 

【文章來源】：寧夏醫(yī)科大學(xué)寧夏回族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

基因樹聚類分析（130個探針）

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果21圖3目的基因ZNF577EVX2和ZNF577基因啟動子甲基化引物及非甲基化引物（表8）均從MethPrimer網(wǎng)站設(shè)計，并且從肺癌A549細(xì)胞株及部分肺癌組織驗證其特異性。表8甲基化及非甲基化引物設(shè)計結(jié)果引物名稱上游引物5`-3`下游引物5`-3`退火溫度/℃片段長度/bpEVX2MAGAATTTTTCGTTAAGGGTAAATTCCTAAATAATAACCCGACTTCTTACG65.7129EVX2UAATTTTTTGTTAAGGGTAAATTTGAAAATAATAACCCAACTTCTTACAAC64.5127ZNF577MTTGAAATTTTTGTAAGATTGTCGCCTTTACAACATTAACCAAAAACGCT64.3171ZNF577UTGAAATTTTTGTAAGATTGTTGTGTCTTTACAACATTAACCAAAAACACT63.4170

寧夏醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)果224.EVX2和ZNF577基因啟動子甲基化凝膠電泳驗證結(jié)果：EVX2和ZNF577基因啟動子甲基化在肺癌組織及癌旁組織、肺部良性結(jié)節(jié)組織及結(jié)節(jié)旁組織中甲基化狀態(tài)、實驗中陽性對照及陰性對照的結(jié)果。我們用MSP技術(shù)對全部60對肺組織（40對肺癌組織和20對肺部良性結(jié)節(jié)組織）及配對的血漿標(biāo)本中EVX2和ZNF577基因啟動子甲基化狀態(tài)檢測，40對肺癌組織中28例（70.0%）EVX2基因啟動子呈甲基化狀態(tài)，23例（57.5%）ZNF577基因啟動子呈甲基化的狀態(tài)，20例肺部良性結(jié)節(jié)組織中EVX2和ZNF577基因啟動子甲基化各1例（5.0%），40例肺癌血漿中有23例（57.5%）EVX2基因呈甲基化狀態(tài)，12例（30.0%）ZNF577基因呈甲基化狀態(tài)，20例肺良性組織血漿中EVX2和ZNF577基因甲基化各有1例（5.0%），其中部分甲基化PCR結(jié)果如下圖（圖4-圖13）。圖4EVX2基因甲基化狀態(tài)在肺癌中的凝膠電泳圖（1）圖5EVX2基因甲基化狀態(tài)在肺癌中的凝膠電泳圖（2）圖6EVX2基因甲基化狀態(tài)在肺癌中的凝膠電泳圖（3）

【參考文獻】：
期刊論文
[1]中國肺癌和煙草流行及控?zé)煬F(xiàn)狀[J]. 鄒小農(nóng),賈漫漫,王鑫,支修益.  中國肺癌雜志. 2017(08)
[2]中國癌癥發(fā)病、死亡現(xiàn)狀與趨勢分析[J]. 曾倩,崔芳芳,宇傳華,張干深.  中國衛(wèi)生統(tǒng)計. 2016(02)



本文編號：3369514