發(fā)布時間：2021-08-20 18:44

　　第一部分甲基丙二酸血癥熱點致病基因突變的選擇和基因檢測目的:甲基丙二酸血癥是我國最常見的有機酸代謝障礙。該病的病因較為復(fù)雜,多種基因突變均可引起甲基丙二酰輔酶A變位酶的缺乏或其輔酶鈷胺素代謝障礙,從而導(dǎo)致患兒發(fā)病。不同國家和地區(qū)的生化表型及基因譜不盡相同。由于山東半島的甲基丙二酸血癥發(fā)病率明顯高于其他地區(qū),擬在我地區(qū)進行甲基丙二酸血癥攜帶者篩查,了解疾病高發(fā)原因。本研究的主要目的為:第一,通過收集我中心完成基因檢測的甲基丙二酸血癥患者了解我地區(qū)甲基丙二酸血癥的熱點基因和突變,并結(jié)合文獻篩選該地區(qū)常見的突變基因和突變位點,用于進行山東半島甲基丙二酸血癥攜帶者篩查。第二:根據(jù)選擇位點設(shè)計特異性引物,優(yōu)化PCR反應(yīng)條件,采用多重PCR結(jié)合二代測序的方法,旨在建立和評估適合本地區(qū)特點的熱點基因突變的基因檢測及大規(guī)模人群篩查的技術(shù)路線,并收集4例甲基丙二酸血癥陽性樣本及6例正常樣本,明確檢測方法的科學(xué)性和準(zhǔn)確性。方法:收集完成基因檢測的甲基丙二酸血癥患兒35例,結(jié)合我國文獻報道進行山東半島甲基丙二酸血癥熱點基因、熱點位點的選擇。針對選擇的突變位點,利用Primer Z軟件設(shè)計PCR引物。收集甲基... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁數(shù)】：100 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

凝膠電泳結(jié)果

實驗結(jié)果412.3各分型甲基丙二酸血癥篩查分布情況MMACHC基因篩查出攜帶者人數(shù)為109人，占87.2%；MUT篩查出攜帶者人數(shù)為16人，占12.8%（圖2.1）。圖2.1各分型甲基丙二酸血癥攜帶者分布情況3熱點突變位點攜帶情況3.1MMACHC基因MMACHC基因篩查的熱點突變位點的總體攜帶率為1/46。其中c.609G>A攜帶率為0.84%、c.658_660delAAG攜帶率為0.28%、c.80A>G攜帶率為0.18%、c.217C>T攜帶率為0.12%、c.567_568insT攜帶率為0.14%、c.482G>A攜帶率為0.36%、c.315C>G攜帶率為0.22%。最常見的突變位點為c.609G>A，占所有熱點位點的38.53%；其次分別為c.482G>A和c.658_660delAAG，分別占所有熱點位點的16.51%、12.84%（表2.4）。由于篩查位點的僅為大約90%的MMACHC基因突變，推測cblC型甲基丙二酸血癥致病基因的總體攜帶率為1/41左右。MMACHC基因87.2%MUT基因12.8%

凝膠電泳結(jié)果


本文編號：3354033