目的骨橋蛋白（OPN）在腫瘤的遷徙和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用,但目前泡狀棘球蚴在宿主體內(nèi)遷徙和轉(zhuǎn)移機(jī)制尚不明確。文中旨在擴(kuò)增多房棘球絳蟲OPN全長(zhǎng)基因序列并進(jìn)行其生物學(xué)分析。方法提取泡球蚴原頭節(jié)總RNA,逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,從基因數(shù)據(jù)庫(kù)中通過BLAST找到可能的OPN基因保守序列片段設(shè)計(jì)引物,PCR擴(kuò)增目的基因測(cè)序并鑒定其為同源性片段,然后應(yīng)用RACE方法對(duì)該目的基因進(jìn)行擴(kuò)增。對(duì)得到的泡球蚴OPN全長(zhǎng)基因序列進(jìn)行功能和結(jié)構(gòu)分析。結(jié)果泡球蚴OPN cDNA全長(zhǎng)1390 bp。相對(duì)分子質(zhì)量為50 363.75,理論等電點(diǎn)（pl）為11.18,其中含有411個(gè)腺嘌呤、297個(gè)胞嘧啶、334個(gè)鳥嘌呤、348個(gè)胸腺嘧啶。ORF長(zhǎng)度為849 bp,編碼641個(gè)氨基酸,始于96 bp,止于944 bp。二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)α-螺旋（h）占20.81%,β-折疊（e）占15.26%,β-轉(zhuǎn)角（t）占10.08%,無規(guī)則卷曲（c）占53.85%。結(jié)論成功克隆了泡球蚴OPN基因并研究分析其序列及蛋白,為其功能研究奠定了基礎(chǔ)。 

【文章來源】：醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2020,33(10)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

泡球蚴總RNA提取

以cDNA為模板PCR擴(kuò)增泡球蚴OPN基因同源片段,獲得目的基因片段,見圖2。測(cè)序序列上傳至NCBI BLAST與EMmg-13d08.q1k比對(duì)同源性為97%。2.3 泡球蚴OPN基因3′RACE、5′RACE擴(kuò)增結(jié)果

3′RACE巢氏PCR擴(kuò)增后將產(chǎn)物切膠回收測(cè)序得到一長(zhǎng)度為113 bp帶有PolyA尾的堿基序列。5′RACE 巢氏PCR擴(kuò)增后將產(chǎn)物回收與pMDl8-T 載體連接,進(jìn)行菌落PCR后正反雙向測(cè)序分別得到長(zhǎng)度為582 bp、578 bp的序列,經(jīng)工具拼接長(zhǎng)度為955 bp大小堿基序列。見圖3。2.4 獲得泡球蚴OPN全長(zhǎng)序列及生物學(xué)分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]西藏地區(qū)棘球蚴病流行現(xiàn)狀與成因分析[J]. 蘇中華,王冬經(jīng),云旦平措,益西旺扎,參木有,索朗斯珠.  甘肅畜牧獸醫(yī). 2019(08)
[2]包蟲組學(xué)研究在新藥研制中的應(yīng)用進(jìn)展[J]. 朱效偉,韓秀敏,張強(qiáng).  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2018(02)
[3]青南高原多房棘球蚴SBACT5基因的克隆和生物信息學(xué)分析[J]. 何順偉,李曉燕,李洪清,趙瑞雪,魏曉星.  醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào). 2017(08)
[4]包蟲病病原在我國(guó)的流行現(xiàn)狀及成因分析[J]. 劉平,李金花,李印,康京麗,戴琪,趙娜,孫向東.  中國(guó)動(dòng)物檢疫. 2016(01)
[5]棘球蚴病防治成就及面臨的挑戰(zhàn)[J]. 溫浩,吐爾干艾力·阿吉,邵英梅,林仁勇,李海濤,吐爾洪江·吐遜,呂國(guó)棟,張文寶.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2015(06)
[6]骨橋蛋白與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 商冠寧,趙巖,王玉名,孫平.  現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué). 2012(02)
[7]抗骨橋蛋白抗體抑制肝泡型棘球蚴侵襲性生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移[J]. 張示杰,張龍,趙江橋,張永國(guó),吳向未,彭心宇,曹玉文,楊宏強(qiáng),呂海龍,孫紅,陳孝平.  中國(guó)寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2011(06)

碩士論文
[1]骨橋蛋白在泡狀棘球蚴侵襲性生長(zhǎng)中的作用和應(yīng)用研究[D]. 張龍.石河子大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3352826