目的探究血管內(nèi)皮生長因子165（VEGF165）、骨形態(tài)發(fā)生蛋白（BMP2）雙基因轉(zhuǎn)染SD大鼠骨髓基質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）及其基因表達(dá)與體外成骨能力。方法提取SD大鼠脛骨骨髓,原代培養(yǎng)獲得BMSCs并進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)鑒定。通過脂質(zhì)體（Lipofect-amine2000）介導(dǎo)VEGF165、BMP2基因轉(zhuǎn)染SD大鼠BMSCs,并分為pIRES-hBMP2-hVEGF165轉(zhuǎn)染組（雙基因轉(zhuǎn)染）、pIRES-hBMP2轉(zhuǎn)染組（單基因轉(zhuǎn)染）、pIREShVEGF165轉(zhuǎn)染組（單基因轉(zhuǎn)染）、空載轉(zhuǎn)染組（空白對照）。采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法（MTT）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、組織學(xué)染色方法評估基因轉(zhuǎn)染BMSCs的增殖情況、基因表達(dá)及體外成骨能力。結(jié)果流式細(xì)胞鑒定培養(yǎng)的BMSCs表面Marker示CD44和CD90標(biāo)志物陽性,CD34和CD45標(biāo)志物為陰性,證實(shí)成功獲取大鼠BMSCs。通過熒光顯微鏡觀察各轉(zhuǎn)染組BMSCs,24h后可見綠色熒光發(fā)出,表明轉(zhuǎn)染成功。MTT結(jié)果顯示:隨著時(shí)間的延長,各轉(zhuǎn)染組BMSCs細(xì)胞的數(shù)量呈上升趨勢,與未轉(zhuǎn)染BMSCs的相比,細(xì)胞數(shù)量峰值無明顯差異,證實(shí)轉(zhuǎn)染后BM... 

【文章來源】：重慶醫(yī)學(xué). 2020,49(20)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

pIRES-hBMP2-hVEGF165轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染后不同時(shí)間BMSCs免疫熒光

除空載轉(zhuǎn)染組外，通過熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染后BMSCs，轉(zhuǎn)染24h后，pIRES-hBMP2-hVEGF165轉(zhuǎn)染組可見少量綠色熒光，證實(shí)轉(zhuǎn)染成功；轉(zhuǎn)染3d后，鏡下熒光強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，轉(zhuǎn)染率明顯提高，見圖1。圖3 各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞BMP2蛋白水平

各轉(zhuǎn)染組細(xì)胞BMP2蛋白水平

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]骨形態(tài)發(fā)生蛋白2和血管內(nèi)皮生長因子165雙基因轉(zhuǎn)染骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的異位誘導(dǎo)成骨能力[J]. 周航宇,夏德林,甘生遠(yuǎn),邵學(xué)磊.  中國組織工程研究. 2017(09)
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本文編號：3330479