分生組織的發(fā)育會影響植物的形態(tài)建成,而植株形態(tài)會極大影響園林植物的群落配置與景觀效果。為促進沙柳（Salixpsammophila）的分子定向育種,研究其基因調(diào)控機理,本研究利用同源克隆技術克隆獲得沙柳SpsLAS2、SpsLAS3基因并做生物信息學及組織特異性表達分析,構建35s::SpsLAS2與35s::SpsLAS3超量表達載體。通過Sitefinding-PCR技術克隆SpsLAS2基因的5’調(diào)控區(qū)序列片段并做序列分析。具體研究結(jié)果如下:1.通過同源克隆技術獲得沙柳SpLAS2與SpsLAS3基因的CDS序列,研究發(fā)現(xiàn)SpsLAS2和SpsLAS3基因序列相似性達96.69%,氨基酸序列相似性達97.6%。SpsLAS2和SpsLAS3基因ORF長分別為1248、1254 bp,分別編碼415和417個氨基酸殘基。其氨基酸序列具有 GRS（GIBBERELLIN-INSENSITIVE,REPRESSOR of ga1-3,SCARECROW）基因家族典型的五個結(jié)構域[1],屬LS亞家族。2.同源蛋白序列比對與系統(tǒng)進化樹構建表明,沙柳SpsLAS2、SpsLAS3蛋白序列與歐... 

【文章來源】：內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學內(nèi)蒙古自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１?ＧＡＲＳ蛋白分子結(jié)構［６２］??６

Ｂｏｌｌｅ［６６］等對模式植物擬南芥和水稻的基因家族進行進化分析，將Ｇ兄４５??基因家族劃分為８個亞家族：Ｌ／ＳＣＸ、別７７、ＳＣｉ３、Ｚ）￡ＸＺ＾、Ｓｄ?＊Ｓ７／ｉ？、ｉ＾和／ＭＭ??（如圖２）。他＾＾［６７］等通過進化樹分析將０反八３基因家族分為１３個亞家族乂＿７７、??ＡｔＳＣＬ４／７、ＡｔＳＣＬ９、ＡｔＳＨＲ、ＨＡＭ、ＡｔＬＡＳ、ＡｔＳＣＲ、Ａ－ｔＳＣＬ３、ＡｔＳＣＬ２８、ＤＥＬＬＡ、??尸ｄ?ＯＭ和付。其研究結(jié)果表明不同植物中基因家族序列存在高度相??似性，這表明該家族在植物中可能是通過串聯(lián)復制產(chǎn)生重復基因而進行進化的。由??于序列高度保守，同一亞家族成員在功能上也具有相似性或相關性。??—ｒ？纖＂ｄｉｍ念｛５】於??一―—二…?，＾?１?■歲?Ａｔ?????????????．．．．．．－ｐ：：＝ｚ：ｒｒ：??ｒ－———?＆￣ｃｒｒｚ?ｉｔ?ＳＳ??＇?｛?４??ｉ＊獅哪料．：ｐ雄．＊貧??一卿—一？ｎ￡＾ｃｒ＝??ｒ———————屬｜￡??＇１．…—Ｉ?＾?ｊｒＵＩ－－ｃｚｚｚ??ｌ￣ｎ?ｒ??ｔｍ??ｉ＾ｃｚｒ：念雜??Ｍｇ＾ｊＬＪｋ?緣?Ｉ?ｌ…．．－???…＇『一一＜？麵務??－?１?．“、＞？、—??Ｌ．．．．，，，，．．．，．，＾ＷＯａ－＾??－．一一一．．．???一ｒ°—？？＂？＊＊＊?？〇？＃???—?？＾Ｐ１＇??ｆ＿＿纖＾＾娘??ｘｍｕｕ＾一????＾，ｒ－＾Ｃ：?－：：？：?ＳＳ??瞻?Ｌ??ｉ?「￣？Ｍ＝ｎＳｓｉ??—?＊?￣７＝＝ｍ

采用?Ｔｈｅｒｍｏ?Ｆｉｓｈｅｒ?公司生產(chǎn)的?ＧｅｎｅＪＥＴ?Ｐｌａｎｔ?ＲＮＡ?Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ?Ｋｉｔ?試劑盒進行??沙柳總ＲＮＡ的提取。采用紫外分光光度計進行濃度檢測，濃度為２７７８?ｎｇ／ｐｌ電泳結(jié)??果顯示２８?ｓ條帶亮度約是１８?ｓ處的兩倍（如圖３），說明ＲＮＡ提取質(zhì)量較好。??１??２８ｓ—ｉ，??１８ｓ—??—??圖３沙柳總ＲＮＡ電泳圖??Ｆｉｇ．３?Ｔｏｔａｌ?ＲＮＡ?ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｏｇｒａｍ?ｏｆ?Ｓａｌｉｘ?ｐｓａｍｍｏｐｈｉｌａ??３．?１．２設計及測試引物結(jié)果??提取沙柳全株ＲＮＡ并進行ｃＤＮＡ第一鏈的合成，以ｃＤＮＡ第一鏈為模板，利??用所設計的５’端ＵＴＲ區(qū)引物與３＇端ＵＴＲ區(qū)引物，在２０?｜ｉｌ?Ｐｆｕ高保真酶體系下進行??ＰＣＲ的擴增，得到目標條帶，利用Ｔｒａｎｓ２Ｋ?ＤＮＡ?Ｍａｒｋｅｒ進行長度判斷，目標條帶??為預估約為１５００?ｂｐ左右，實際亮度條帶在１０００?ｂｐ與２０００?ｂｐ之間，約為１５００?ｂｐ??符合預估條件（如圖４）。??Ｍ?１??２?ｏｏｏｂ?ｐ??滅＿??圖４目標基因擴增電泳檢測??Ｆｉｇ．?４?Ｅｌｅｃｔｒｏｆｈｏｒｅｓｉｓ?ｐａｔｔｅｒｎ?ｏｆ?ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅ??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]興安落葉松UDP焦磷酸化酶基因啟動子的克隆及雙元載體的構建[J]. 梅麗麗,郭鑫,張堯,林曉飛,張文波.  分子植物育種. 2018(22)
[2]沙柳SpsLAS基因超表達對擬南芥營養(yǎng)生長的影響[J]. 張磊,路東曄,張國盛,楊海峰.  西北植物學報. 2018(02)
[3]植物TCP轉(zhuǎn)錄因子的作用機理及其應用研究進展[J]. 馮志娟,徐盛春,劉娜,張古文,胡齊贊,龔亞明.  植物遺傳資源學報. 2018(01)
[4]北沙柳種質(zhì)資源居群表型多樣性[J]. 郝蕾,張國盛,穆喜云,韓勝利,王穎,寧瑞些,白玉榮,張磊.  西北植物學報. 2017(05)
[5]沙柳SpsLAZY1a和SpsLAZY1b基因克隆及生物信息學分析[J]. 張磊,葉志瑋,趙晨曦,張國盛,楊海峰.  西北林學院學報. 2017(01)
[6]沙柳PNY基因克隆、生物信息學及組織特異性表達[J]. 楊海峰,王文娟,劉樂,卜松雪,張雅喃,何麗君.  東北林業(yè)大學學報. 2017(01)
[7]沙柳SpsLAS基因克隆及生物信息學分析[J]. 路東曄,賀玉嬌,金娜,劉樂,卜松雪,王雷,楊海峰.  分子植物育種. 2017(02)
[8]沙柳組培技術初探[J]. 敖敦,楊海峰,王雷,馬月林.  福建林業(yè)科技. 2016(01)
[9]毛烏素沙地人工沙柳（Salix psammophila）林平茬復壯技術[J]. 海龍,王曉江,張文軍,張雷,洪光宇,李卓凡.  中國沙漠. 2016(01)
[10]Cd脅迫對水稻生長及內(nèi)源激素含量的影響[J]. 游來勇,王昌全,羅娟,李冰,曾建.  生態(tài)環(huán)境學報. 2015(05)

博士論文
[1]簸箕柳基因組測序及功能基因研究[D]. 戴曉港.南京林業(yè)大學 2017
[2]楊柳分化及其性別決定的基因組學基礎[D]. 侯靜.南京林業(yè)大學 2016
[3]煙草腋芽發(fā)育相關基因的克隆與功能分析[D]. 陳雅瓊.中國農(nóng)業(yè)科學院 2015
[4]楊樹miRNA基因家族進化與靶基因研究[D]. 劉志祥.中南林業(yè)科技大學 2013
[5]楊柳木材纖維增強沙柳材中密度纖維板基礎理論與關鍵技術研究[D]. 李奇.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2012
[6]沙柳沙障腐蝕過程及防腐抗蝕效果研究[D]. 龔萍.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2012
[7]北沙柳種質(zhì)資源的多樣性分析與優(yōu)良無性系篩選[D]. 張瑋.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2011
[8]甘藍型油菜GRAS家族基因BnLAS的分離和功能分析[D]. 楊明貴.華中農(nóng)業(yè)大學 2010
[9]庫布齊沙漠沙柳培育關鍵技術研究[D]. 米志英.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2008

碩士論文
[1]沙柳SpsFUCT基因的克隆、組織特異性表達及表達載體構建[D]. 楊楊.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2018
[2]沙柳SpsLAS基因克隆、組織特異性表達及表達載體構建[D]. 路東曄.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2017
[3]不同平茬高度對沙柳生長狀況的影響研究[D]. 馬天琴.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2017
[4]8種柳屬植物微體快繁關鍵技術的研究[D]. 崔敏.中國林業(yè)科學研究院 2017
[5]沙柳TAC1基因克隆與生物信息學及組織表達特性分析[D]. 馬月林.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2016
[6]兩種芋蘭分枝發(fā)育相關基因LS及其調(diào)控區(qū)的克隆與表達分析[D]. 陳秀珍.廣州中醫(yī)藥大學 2016
[7]沙柳基活性炭對水體中染料和酚類物質(zhì)的吸附研究[D]. 劉靜萱.鄭州大學 2016
[8]沙柳組培快繁和再生體系建立的初步研究[D]. 敖敦.內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學 2015
[9]不同生境對園林植物構型的影響[D]. 陳夢依.福建農(nóng)林大學 2015
[10]AtNAC1轉(zhuǎn)錄因子的分子建模和鐵皮石斛NAC家族基因的克隆及表達分析[D]. 朱乾坤.西南交通大學 2014



本文編號：3327282