昆蟲是地球上種群最多且唯一有翅的無脊椎動(dòng)物。翅的產(chǎn)生不僅有利于昆蟲覓食、躲避敵害、擴(kuò)大分布范圍,而且翅對(duì)于某些昆蟲的求偶、交配等行為具有必不可少的重要作用。家蠶屬于鱗翅目昆蟲,同時(shí)又是重要的模式昆蟲,但是對(duì)家蠶的翅發(fā)育機(jī)制的研究仍然存在一些未知的問題。本研究主要從兩個(gè)方向?qū)φ{(diào)控家蠶翅發(fā)育的基因進(jìn)行了研究和功能驗(yàn)證。首先從正向遺傳學(xué)的方向出發(fā),利用STS分子定位技術(shù),將家蠶雛翅突變的基因（mw）定位于第22號(hào)染色體上的275kb的范圍內(nèi)。通過比對(duì)在定位的275kb的區(qū)域內(nèi),一共存在15個(gè)候選基因。通過對(duì)這15個(gè)基因在mRNA水平的表達(dá)分析,基因Bmapp在翅原基中具有很高的表達(dá),同時(shí)在突變體和野生型中存在明顯的表達(dá)差異,因此推測(cè)Bmapp可能是導(dǎo)致雛翅表型的關(guān)鍵基因。之后利用CRISPR/Cas9系統(tǒng),對(duì)家蠶早期胚胎直接注射體外合成的Cas9mRNA和針對(duì)Bmapp的特異的sgRNA混合物,從而獲得了敲除Bmapp的突變體家蠶。在Bmapp突變體家蠶中,家蠶翅發(fā)育異常,與雛翅突變體相似,因此確定Bmapp是雛翅突變的關(guān)鍵基因。通過對(duì)雛翅突變體和野生型家蠶Bmapp基因順式調(diào)控元件的比較發(fā)... 

【文章來源】：江蘇科技大學(xué)江蘇省

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第1章 緒論
    1.1 昆蟲的翅發(fā)育的研究
        1.1.1 果蠅的翅發(fā)育的研究
        1.1.2 家蠶的翅發(fā)育的研究
    1.2 參與翅發(fā)育調(diào)控的相關(guān)信號(hào)通路的研究
    1.3 家蠶翅發(fā)育機(jī)制的研究現(xiàn)狀
        1.3.1 利用正向遺傳技術(shù)對(duì)家蠶翅發(fā)育的研究
        1.3.2 利用反向遺傳技術(shù)對(duì)家蠶翅發(fā)育的研究
    1.4 本研究的主要內(nèi)容和結(jié)果
第2章 家蠶雛翅基因(mw)的定位與功能分析
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)技術(shù)路線
    2.3 材料與方法
        2.3.1 材料
        2.3.2 主要藥品、試劑和試驗(yàn)儀器
        2.3.3 實(shí)驗(yàn)方法
    2.4 結(jié)果與分析
        2.4.1 雛翅突變候選基因的定位與表達(dá)譜構(gòu)建
        2.4.2 雛翅突變基因Bmapp的驗(yàn)證
        2.4.3 Bmapp啟動(dòng)子的突變導(dǎo)致雛翅的產(chǎn)生
        2.4.4 Bmapp敲除影響Hippo通路基因的表達(dá)
    2.5 討論
    2.6 本章小結(jié)
第3章 家蠶Hedgehog基因的功能分析
    3.1 引言
    3.2 材料和方法
        3.2.1 材料
        3.2.2 主要藥品、試劑和試驗(yàn)儀器
        3.2.3 實(shí)驗(yàn)方法
    3.3 結(jié)果與討論
        3.3.1 轉(zhuǎn)基因家蠶的獲得
        3.3.2 BmHh突變表型觀察
        3.3.3 BmHh靶點(diǎn)突變檢測(cè)
        3.3.4 Hedgehog信號(hào)通路基因表達(dá)的檢測(cè)
    3.4 本章小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]利用STS標(biāo)記對(duì)家蠶雛翅基因mw的定位分析[J]. 馬曉,劉先方,易曉莉,侯成香,李冰,李木旺.  蠶業(yè)科學(xué). 2013(06)



本文編號(hào)：3321500