目的檢測(cè)LDOC1在結(jié)腸癌中的表達(dá)情況,并研究其對(duì)結(jié)腸癌的生物學(xué)功能的影響及相關(guān)分子機(jī)制。為結(jié)腸癌的早期診斷和有效治療提供新的靶點(diǎn)。方法通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR和免疫組化方法檢測(cè)LDOC1在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)情況,再利用RT-PCR方法檢測(cè)LDOC1在結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)情況。將LDOC1過(guò)表達(dá)慢病毒和空病毒轉(zhuǎn)染至Caco2和HCT-116結(jié)腸癌細(xì)胞后,通過(guò)RT-PCR和western-bolt檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率,運(yùn)用CCK-8、克隆形成、流式細(xì)胞術(shù)、Transwell等實(shí)驗(yàn),分別檢測(cè)LDOC1對(duì)細(xì)胞增殖、周期、凋亡、遷移和侵襲的影響。通過(guò)Western-blot和細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白、Wnt/β-catenin信號(hào)通路及EMT相關(guān)分子的表達(dá)。最后加入Wnt通路激活劑IM-12后,通過(guò)Western-blot實(shí)驗(yàn)再次檢測(cè)Wnt/β-catenin信號(hào)通路及EMT相關(guān)分子的表達(dá)。結(jié)果LDOC1在結(jié)腸癌組織和4株結(jié)腸癌細(xì)胞中均呈現(xiàn)出低表達(dá)。過(guò)表達(dá)LDOC1后,Caco2和HCT-116細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲能力明顯降低,細(xì)胞周期阻滯而凋亡率明顯增加。同時(shí),過(guò)表達(dá)LDOC1后,促凋亡蛋白明顯增... 

【文章來(lái)源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁(yè)數(shù)】：49 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

LDOC1在結(jié)腸癌組織及正常結(jié)腸組織中的表達(dá)Figure1:TheexpressionlevelsofLDOC1incoloncancertissuesandnormalcolontissues.

圖 1：LDOC1 在結(jié)腸癌組織及正常結(jié)腸組織中的表達(dá)igure 1: The expression levels of LDOC1 in colon cancer tissues and normal colon tiss LDOC1 在結(jié)腸癌細(xì)胞中表達(dá)呈顯著下降通過(guò) RT-PCR 的方法，我們檢測(cè)了 LDOC1 在 4 株結(jié)腸癌細(xì)胞中的表達(dá)顯示相對(duì)于正常結(jié)腸組織，LDOC1mRNA 在結(jié)腸癌細(xì)胞中表達(dá)呈顯著下.05，圖 2）。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文3.3 慢病毒轉(zhuǎn)染效率的驗(yàn)證通過(guò)慢病毒感染構(gòu)建了穩(wěn)定表達(dá) LDOC1 的結(jié)腸癌細(xì)胞株（HCT-116、Caco2），分別提取兩株細(xì)胞的總 mRNA 和總蛋白，通過(guò) RT-PCR 和 Western-bolt 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證慢病毒的轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果顯示，相較于對(duì)照組（Lv-NC），實(shí)驗(yàn)組（Lv-LDOC1）的 LDOC1mRNA 和蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(*P＜0.05，**P＜0.01，圖 3 A-B)。


本文編號(hào)：3312148