目的:Wolfram綜合征以尿崩癥、糖尿病、視神經(jīng)萎縮和神經(jīng)性耳聾為主要臨床表現(xiàn),是一種特殊類(lèi)型糖尿病,編碼wolframin蛋白的WFS1基因突變是其發(fā)病的主要原因。本研究對(duì)臨床發(fā)現(xiàn)的一例Wolfram綜合征患者WFS1基因進(jìn)行突變篩查,并對(duì)該突變以及本課題組以往在Wolfram綜合征家系中發(fā)現(xiàn)的WFS1基因突變（F417de1、Y534D）進(jìn)行體外克隆及相關(guān)功能驗(yàn)證。為了對(duì)WFS1基因的功能有進(jìn)一步的了解,我們對(duì)Wfs1基因敲除小鼠的肝臟組織RNA全基因表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行DEG分析。方法:提取先證者及其父母外周血基因組DNA進(jìn)行測(cè)序分析,找到WFS1基因突變位點(diǎn);在體外應(yīng)用誘導(dǎo)定點(diǎn)突變的方法進(jìn)行WFS1基因突變的體外克隆,構(gòu)建攜帶突變WFS1基因的表達(dá)質(zhì)粒;將質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染細(xì)胞系,應(yīng)用蛋白免疫印跡及實(shí)時(shí)熒光定量PCR的方法檢測(cè)突變WFS1基因表達(dá)產(chǎn)物的水平;利用蛋白酶體抑制劑以及溶酶體抑制劑分析突變WFS1基因蛋白產(chǎn)物表達(dá)量的改變是否與降解有關(guān);通過(guò)細(xì)胞免疫熒光技術(shù)在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染突變WFS1基因的COS7細(xì)胞系中觀(guān)察突變wolframin蛋白的亞細(xì)胞定位;通過(guò)雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)檢測(cè)瞬... 

【文章來(lái)源】：上海交通大學(xué)上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１健康對(duì)照、先證者母親、先證者灰基因測(cè)序峰圖（箭頭所示為??突變位點(diǎn)）??Ｆｉｇｕｒｅ?１?Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＷＦＳ１?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ａ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?ｔｈｅ?ｐｒｏｂａｎｄ?ａｎｄ??

?上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院２０１６級(jí)碩士研宄生學(xué)位論文???ＣＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＴＴＣＴＧＣＴＧＧＴＴＣＴＡＴＧＴＧＴＡＣＣＧＣＴＣＡＧ??ｃｏｎｔｒｏｌ?ａ??ＣＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＴＴＣＴＧＣＴＧＡＴＴＣＴＡＴＧＴＧＴＡＣＣＧＣＴＣＡＧ??Ｐ．Ｗ６４８Ｘ??ＣＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＴＴＣＴＧＣＴＧＡＴＴＣＴＡＴＧＴＧＴＡＣＣＧＣＴＣＡＧ??Ｐ．Ｗ６４８Ｘ??ｐｒｏｂａｎｄ?ｆｉ?．??圖２健康對(duì)照、先證者父親、先證者灰基因測(cè)序峰圖（箭頭所示為??突變位點(diǎn)）??Ｆｉｇｕｒｅ２?Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＷＦＳ１?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ａ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?ｔｈｅ?ｐｒｏｂａｎｄ?ａｎｄ??ｈｅｒ?ｆａｔｈｅｒ．?（Ｔｈｅ?ａｒｒｏｗｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ｔｈｅ?ｍｕｔａｔｉｏｎ．）??Ｎｏｒｍａｌ?ｆｅｍａｌｅ??ＭｉＮ?Ｍ２Ｎ?Ｉ?１??Ｇ５２６Ｄ?Ｗ６４８Ｘ?Ｎｏｒｍａｌ?ｍａｌｅ??Ｐｒｏｂａｎｄ??＾?Ｍ１Ｍ２??Ｇ５２６Ｄ／Ｗ６４８Ｘ??Ｍ：?ｍｕｔａｎｔ?ａｌｌｅｌｅ?Ｎ：?ｎｏｎ－ｍｕｔａｎｔ?ａｌｌｅｌｅ??圖３?Ｗｏｌｆｒａｍ綜合征患者家系圖??Ｆｉｇｕｒｅ３?Ｐｅｄｉｇｒｅｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｗｏｌｆｒａｍ?ｓｙｎｄｒｏｍｅ?ｐａｔｉｅｎｔ．??１．４討論??Ｗｏｌｆｒａｍ綜合征常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)包括糖尿并視神經(jīng)萎縮、尿崩癥、感音神??經(jīng)性聾以及進(jìn)行性神經(jīng)功能障礙等糖尿病的發(fā)病年齡中位數(shù)為６歲（３茼齡??１０??

?上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院２０１６級(jí)碩士研宄生學(xué)位論文???ＣＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＴＴＣＴＧＣＴＧＧＴＴＣＴＡＴＧＴＧＴＡＣＣＧＣＴＣＡＧ??ｃｏｎｔｒｏｌ?ａ??ＣＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＴＴＣＴＧＣＴＧＡＴＴＣＴＡＴＧＴＧＴＡＣＣＧＣＴＣＡＧ??Ｐ．Ｗ６４８Ｘ??ＣＣＡＴＣＧＴＧＣＴＧＴＴＣＴＧＣＴＧＡＴＴＣＴＡＴＧＴＧＴＡＣＣＧＣＴＣＡＧ??Ｐ．Ｗ６４８Ｘ??ｐｒｏｂａｎｄ?ｆｉ?．??圖２健康對(duì)照、先證者父親、先證者灰基因測(cè)序峰圖（箭頭所示為??突變位點(diǎn)）??Ｆｉｇｕｒｅ２?Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ?ｏｆ?ｔｈｅ?ＷＦＳ１?ｇｅｎｅ?ｏｆ?ａ?ｈｅａｌｔｈｙ?ｃｏｎｔｒｏｌ，?ｔｈｅ?ｐｒｏｂａｎｄ?ａｎｄ??ｈｅｒ?ｆａｔｈｅｒ．?（Ｔｈｅ?ａｒｒｏｗｓ?ｉｎｄｉｃａｔｅ?ｔｈｅ?ｍｕｔａｔｉｏｎ．）??Ｎｏｒｍａｌ?ｆｅｍａｌｅ??ＭｉＮ?Ｍ２Ｎ?Ｉ?１??Ｇ５２６Ｄ?Ｗ６４８Ｘ?Ｎｏｒｍａｌ?ｍａｌｅ??Ｐｒｏｂａｎｄ??＾?Ｍ１Ｍ２??Ｇ５２６Ｄ／Ｗ６４８Ｘ??Ｍ：?ｍｕｔａｎｔ?ａｌｌｅｌｅ?Ｎ：?ｎｏｎ－ｍｕｔａｎｔ?ａｌｌｅｌｅ??圖３?Ｗｏｌｆｒａｍ綜合征患者家系圖??Ｆｉｇｕｒｅ３?Ｐｅｄｉｇｒｅｅ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｗｏｌｆｒａｍ?ｓｙｎｄｒｏｍｅ?ｐａｔｉｅｎｔ．??１．４討論??Ｗｏｌｆｒａｍ綜合征常見(jiàn)的臨床表現(xiàn)包括糖尿并視神經(jīng)萎縮、尿崩癥、感音神??經(jīng)性聾以及進(jìn)行性神經(jīng)功能障礙等糖尿病的發(fā)病年齡中位數(shù)為６歲（３茼齡??１０??

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Wolfram綜合征二例[J]. 李青,賈偉平,方啟晨.  中華內(nèi)科雜志. 2005(11)
[2]中國(guó)人Wolfram綜合征WFS1基因的新突變[J]. 方啟晨,賈偉平,張蓉,李青,胡承,邵新宇,柴華旗,陸惠娟,項(xiàng)坤三.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2005(35)



本文編號(hào)：3292661