DREPP（developmentally regulated plasma membrane polypetides,Pfam:PF05558）蛋白在植物中廣泛存在,研究表明DREPP家族蛋白參與了植物對生物和非生物脅迫的響應與調控。本研究從甘藍型油菜品種"中雙11號"中通過分子克隆手段成功克隆獲得2個編碼甘藍型油菜BnDREPP蛋白基因的全長CDS序列,構建植物過表達載體并轉化擬南芥,利用實時熒光定量PCR研究甘藍型油菜BnDREPPs基因的組織表達特性及其對外界非生物脅迫響應特點。主要工作內容及結果如下:1、甘藍型油菜BnDREPPs基因生物信息學分析本研究利用同源克隆的方法,將擬南芥DREPP家族蛋白成員MDP25蛋白序列在甘藍型油菜基因組數據庫中進行比對,得到4個與MDP25同源的候選基因,分別命名為BnDREPP1/BnDREPP2、BnDREPP3、BnDREPP4。其中 BnDREPP1、BnDREPP2 和 BnDREPP3分別與甘藍型油菜數據庫中的BnaA0lg35060D、BnaC07g36310D和BnaA03g44480D相對應,而BnDREPP4在油菜染色體... 

【文章來源】：福建農林大學福建省

【文章頁數】：81 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略語
1 文獻綜述
    1.1 研究背景
        1.1.1 植物的非生物脅迫
        1.1.2 植物DREPP蛋白的發(fā)現
        1.1.3 植物DREPP蛋白功能研究進展
    1.2 研究目的及意義
        1.2.1 研究目的及意義
        1.2.2 主要研究內容
        1.2.3 研究技術路線
2 甘藍型油菜BnDREPPs基因的生物信息學分析
    2.1 實驗方法與步驟
        2.1.1 甘藍型油菜BnDREPPs基因的同源檢索
        2.1.2 目的基因生物信息學分析
    2.2 實驗結果與分析
        2.2.1 甘藍型油菜BnDREPPs基因序列分析
        2.2.2 甘藍型油菜BnDREPP蛋白一級結構預測分析
        2.2.3 甘藍型油菜BnDREPP蛋白二級結構預測分析
        2.2.4 甘藍型油菜BnDR EPP蛋白三級結構預測分析
        2.2.5 甘藍型油菜BnDREPP蛋白信號肽及跨膜區(qū)預測
        2.2.6 甘藍型油菜BnDREPP蛋白的功能結構域和亞細胞定位預測
        2.2.7 甘藍型油菜BnDREPP蛋白功能預測
        2.2.8 甘藍型油菜BnDREPP蛋白多序列比對和進化分析
    2.3 討論和小結
3 甘藍型油菜BnDREPPs基因超表達載體的構建及擬南芥轉化
    3.1 實驗材料
        3.1.1 植物材料和菌株
        3.1.2 主要實驗試劑
        3.1.3 主要儀器設備
        3.1.4 主要培養(yǎng)基和溶液的配制
    3.2 目的基因克隆
        3.2.1 引物設計
        3.2.2 甘藍型油菜總RNA的提取
        3.2.3 單鏈cDNA的合成
        3.2.4 BnDREPPs全長CDS序列的擴增
    3.3 目的基因超表達載體的構建
        3.3.1 載體質粒提取
        3.3.2 目的基因的連接及轉化
        3.3.3 重組質粒的PCR鑒定與測序
    3.4 pCXSN::BnDREPP2轉化擬南芥
        3.4.1 農桿菌GV30101感受態(tài)細胞的制備
        3.4.2 凍融法轉化農桿菌
        3.4.3 浸花法轉化擬南芥
        3.4.4 擬南芥幼苗微量DNA的提取
        3.4.5 轉基因擬南芥植株的分子檢測
    3.5 結果與分析
        3.5.1 甘藍型油菜總RNA的提取檢測
        3.5.2 甘藍型油菜BnDREPPs基因的克隆
        3.5.3 目的基因超表達載體的構建與鑒定
        3.5.4 重組質粒轉化農桿菌陽性轉化子的篩選
        3.5.5 轉基因擬南芥T_0代的篩選
        3.5.6 轉基因擬南芥T_0代的檢測及表型觀察
        3.5.7 T_1轉基因代擬南芥的檢測及表型觀察
    3.6 討論和小結
        3.6.1 甘藍型油菜BnDREPPs基因的克隆與載體構建
        3.6.2 農桿菌介導法轉化擬南芥
        3.6.3 轉基因擬南芥植株的檢測及表型觀察
4 甘藍型油菜BnDREPPs基因組織表達分析與脅迫表達分析
    4.1 實驗材料與試劑
        4.1.1 植物材料
        4.1.2 主要儀器設備
        4.1.3 主要試劑及試劑盒
        4.1.4 主要溶液及緩沖液配方
    4.2 實驗方法與步驟
        4.2.1 基因組織表達分析取材
        4.2.2 逆境脅迫處理
        4.2.3 實時熒光定量PCR檢測
    4.3 結果與分析
        4.3.1 甘藍型油菜BnDREPPs基因組織表達模式分析
        4.3.2 非生物脅迫下BnDREPPs基因表達模式分析
    4.4 討論和小結
        4.4.1 甘藍型油菜BnDREPPs基因組織表達分析
        4.4.2 非生物脅迫下甘藍型油菜BnDREPPs的表達模式
5 甘藍型油菜BnDREPP2基因啟動子分析載體的構建
    5.1 實驗材料和試劑
    5.2 實驗方法與步驟
        5.2.1 甘藍型油菜BnDREPP2基因啟動子區(qū)的克隆
        5.2.2 甘藍型油菜BnDREPP2基因啟動子分析載體的構建
    5.3 結果與分析
        5.3.1 甘藍型油菜BnDREPP2基因啟動子區(qū)的克隆
        5.3.2 甘藍型油菜BnDREPP2基因啟動子分析載體的構建及序列分析
    5.4 討論
6 總結與展望
    6.1 主要結論
    6.2 后續(xù)研究工作
參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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[2]擬南芥MAP18調控花粉管生長方向的機理研究[D]. 張焱.中國農業(yè)大學 2014
[3]油菜抗逆相關基因的鑒定和功能研究[D]. 陳良.華中師范大學 2011

碩士論文
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本文編號：3276547