昆蟲病原真菌是昆蟲病原微生物中最大的一個類群,全世界已報道的昆蟲病原真菌有近1000多種,是自然界控制昆蟲種群數(shù)量的主要因素之一。綠僵菌（Metarhzium spp.）是一類重要的昆蟲病原真菌,目前已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于害蟲的防治中[1]。但是由于傳統(tǒng)的綠僵菌農(nóng)藥致病過程較長、殺蟲較慢,不僅田間使用劑量大、成本高,而且防效易受環(huán)境影響,從而限制了綠僵菌殺蟲劑的進(jìn)一步大規(guī)模的應(yīng)用。綠僵菌侵染昆蟲是一個比較復(fù)雜的過程,其蛋白酶在綠僵菌入侵過程中起著重要的作用,是關(guān)鍵的毒力決定因子。目前在綠僵菌中研究較多的類枯草桿菌蛋白酶（Prl）、類胰凝乳蛋白酶（Pr2）。而金屬蛋白酶為綠僵菌侵染昆蟲早期分泌出的一種胞外蛋白酶,也是一種重要的毒力因子。本實(shí)驗(yàn)的前期研究表明,野生型羅伯茨綠僵菌（Mr23）熱激后所形成的的基因表達(dá)譜,金屬蛋白酶1（Mamp1）的基因表達(dá)上調(diào)幅度明顯,因此我們推斷羅伯茨綠僵菌在熱脅迫條件下,Mamp1在孢子的耐熱過程中起重要的作用[2],且目前對Mamp1的毒力因子功能也未見進(jìn)行基因敲除驗(yàn)證。為了探討綠僵菌金屬蛋白酶的確切功能,本研究以野生型綠僵菌ARSEF 23（Metarhi... 

【文章來源】：安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：68 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

目的基因的擴(kuò)增產(chǎn)物條帶進(jìn)行膠回收，然后連接到T載體上轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行克隆，得到的陽性單克隆送Fig.3-1TheamplificationproductsoftargetgeneMamp1

然后連接到 T 載體上轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行克隆，得到的陽性單克大基因進(jìn)行測序，測序結(jié)果用 Vctor 軟件進(jìn)行序列比對分析，結(jié)果與已知Mamp1 的 5′RACE 和 3′RACE 結(jié)果′RACE 反應(yīng)的結(jié)果如 4-2-5a 所示，條帶大小約為 300 bp ， 5′RACE 反應(yīng)Fig.3-1 The amplification products of target gene Mamp1

然后連接到 T 載體上轉(zhuǎn)化大腸桿菌進(jìn)行克隆，得到的陽性單克大基因進(jìn)行測序，測序結(jié)果用 Vctor 軟件進(jìn)行序列比對分析，結(jié)果與已知Mamp1 的 5′RACE 和 3′RACE 結(jié)果′RACE 反應(yīng)的結(jié)果如 4-2-5a 所示，條帶大小約為 300 bp ， 5′RACE 反應(yīng)Fig.3-1 The amplification products of target gene Mamp1

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[7]我國微生物殺蟲劑的研究應(yīng)用及展望[J]. 譚云峰,田志來.  吉林農(nóng)業(yè)科學(xué). 2005(03)
[8]蟲生真菌對害蟲防治的研究與應(yīng)用[J]. 何恒果,李正躍,陳斌,文良柱.  云南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報. 2004(02)
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[10]生物殺蟲劑的研究進(jìn)展與展望[J]. 張善明,姚倫廣,彭建新,洪華珠.  荊州師范學(xué)院學(xué)報. 2000(02)

博士論文
[1]杉木轉(zhuǎn)基因受體系統(tǒng)的建立及遺傳轉(zhuǎn)化研究[D]. 席夢利.南京林業(yè)大學(xué) 2004



本文編號：3259035