目的:探討微小RNA-92a（miR-92a）和微小RNA-19b（miR-19b）對小鼠胰島β細(xì)胞胰島素基因表達(dá)的影響。方法:qPCR檢測小鼠胰島素瘤MIN6細(xì)胞內(nèi)源性miR-92a和miR-19b的相對表達(dá)水平。將MIN6細(xì)胞分為對照組及實驗Ⅰ、Ⅱ組（每組n=3）,分別轉(zhuǎn)染陰性對照miRNA（NC）、miR-92a和miR-19b,qPCR驗證miRNAs的過表達(dá),光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),CCK8法檢測細(xì)胞活力,qPCR、Western blot及免疫熒光檢測胰島素表達(dá)情況,生物信息學(xué)預(yù)測、雙螢光素酶報告基因?qū)嶒灪蚖estern blot分析miR-92a和miR-19b調(diào)控胰島素表達(dá)的可能機制。結(jié)果:與成體胰腺祖細(xì)胞相比,MIN6細(xì)胞內(nèi)源性miR-92a和miR-19b相對表達(dá)量顯著降低（P<0.05）;過表達(dá)miR-92a和miR-19b對MIN6細(xì)胞活力沒有影響,但抑制胰島素mRNA和蛋白表達(dá);miR-19b顯著抑制NeuroD1 3’UTR螢光素酶活性和NeuroD1蛋白表達(dá)（P<0.05）,而miR-92a對NeuroD1 3’UTR螢光素酶活性和NeuroD... 

【文章來源】：中國病理生理雜志. 2020,36(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：9 頁

【部分圖文】：

胰腺祖細(xì)胞和MIN6細(xì)胞光鏡圖

為分析mi R-92a和mi R-19b可能通過調(diào)控哪些基因而影響胰島素表達(dá)，我們通過生物信息學(xué)預(yù)測Neuro D1是mi R-92a和mi R-19b的靶基因，又通過雙螢光素酶報告基因?qū)嶒灪蚖estern blot，檢測到mi R-19b顯著抑制Neuro D1 3′UTR螢光素酶活性和Neuro D1蛋白表達(dá)（P<0.01），而mi R-92a對Neuro D13′UTR螢光素酶活性和Neuro D1蛋白表達(dá)僅起到微調(diào)作用，與NC組相比抑制作用無顯著差異（P>0.05），見圖7。圖3 mi R-92a和mi R-19b在MIN6細(xì)胞中的過表達(dá)

mi R-92a和mi R-19b在MIN6細(xì)胞中的過表達(dá)

【參考文獻】：
期刊論文
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