目的探索細(xì)粒棘球蚴水通道蛋白（Echinococcus granulosus aquaporins,EgAQPs）在棘球蚴液形成過程中的作用。方法收集體外培養(yǎng)不同時(shí)期的棘球蚴標(biāo)本和BALB/c小鼠體內(nèi)接種的繼發(fā)棘球蚴標(biāo)本,RT-qPCR方法檢測(cè)12個(gè)EgAQPs基因在體內(nèi)、體外培養(yǎng)不同發(fā)育時(shí)期的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。以細(xì)粒棘球蚴cDNA為模板,擴(kuò)增EgAQP、EgAQP1、EgAQP3、EgAQP4-1、EgAQP4-4和EgAQP9-1 6個(gè)基因編碼區(qū)片段,同時(shí),通過化學(xué)合成方法擴(kuò)增另外6個(gè)EgAQPs（EgAQPAn.G、EgAQPFA-CHIP、EgAQP4-2、EgAQP4-3、EgAQP4-5、EgAQP9-2）基因編碼區(qū)片段,并在非洲爪蟾卵母細(xì)胞中檢測(cè)這12個(gè)EgAQPs基因的透水功能,Western blot檢測(cè)EgAQPs在卵母細(xì)胞膜上的表達(dá)。結(jié)果體外培養(yǎng)的原頭蚴及感染小鼠的繼發(fā)棘球蚴體積均隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增大,棘球蚴囊內(nèi)透明液體增多。RT-qPCR結(jié)果顯示12個(gè)EgAQPs基因在體內(nèi)、體外培養(yǎng)不同發(fā)育時(shí)間的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平均較低。注射EgAQPs基因的非洲爪蟾卵母細(xì)胞的體積變化... 

【文章來源】：第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,42(21)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：12 頁

【部分圖文】：

體外培養(yǎng)0～180 d的囊化原頭蚴光學(xué)顯微鏡觀察 (×20)

圖1 體外培養(yǎng)0～180 d的囊化原頭蚴光學(xué)顯微鏡觀察 (×20)2.3 RT-qPCR檢測(cè)體內(nèi)、體外培養(yǎng)不同時(shí)期囊化原頭蚴EgAQPs基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平

以ATP6和NDI作為內(nèi)參基因,RT-qPCR檢測(cè)小鼠體內(nèi)培養(yǎng)不同時(shí)期(45 d至15個(gè)月)的繼發(fā)棘球蚴AQPs基因相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平(圖3B)。EgAQP、EgAQPAn.G、EgAQPFA-CHIP、EgAQP1、EgAQP3、EgAQP4-3、EgAQP4-5、EgAQP9-1和EgAQP9-2檢測(cè)幾乎無信號(hào);EgAQP4-1、EgAQP4-2和EgAQP4-4基因雖然有相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)值,但其值都太低,所有AQPs中最大相對(duì)轉(zhuǎn)錄表達(dá)值僅有0.065。2.4 棘球蚴12個(gè)EgAQPs及陽性對(duì)照RnAQP1基因擴(kuò)增及重組質(zhì)粒鑒定


本文編號(hào)：3241728