發(fā)布時間：2021-06-09 03:47

　　小型豬作為模式動物由來已久,相比小鼠等模式生物,小型豬模型體重與人類相當,器官大小也與人類器官相似,而且在生理生化、解剖學和疾病發(fā)生機理等方面都與人類極為相似,許多基因在嚙齒類動物模型中不具備與人體類似的生理代謝相關功能,而豬相比嚙齒類模型更貼近于人,通過在豬上研究相關基因的功能可以更好的驗證其功能。這些優(yōu)勢都使小型豬模型動物比之其他動物模型不論生物或是醫(yī)學研究領域中都具有極為重要的科研和應用價值。在CRISPR/Cas系統(tǒng)出現(xiàn)之前,沒有合適的胚胎干細胞系一直是限制小型豬基因敲除的主要因素,CRISPR/Cas9技術的出現(xiàn)從技術上打破了這一僵局極大的方便了豬基因敲除模型的建立。PDX-1基因在胰腺發(fā)育中起著重要作用,早期胚胎發(fā)育時期,胰腺的發(fā)育主要是通過背腹兩側的上皮芽進行融合從而形成胰芽。在小鼠中生產(chǎn)PDX-1基因敲除純合子小鼠后發(fā)現(xiàn),純合敲除的小鼠缺乏成熟的胰腺組織,并且十二指腸的部分區(qū)域也呈現(xiàn)異常狀態(tài)。出生后的小鼠不能存活很久,會很快死于高血糖。巴馬香豬上PDX-1基因在豬并沒有做過敲除研究,尚不清楚其在豬上的功能。本論文主要研究在小型豬上如何通過超數(shù)排卵獲得大量優(yōu)質胚胎用于胞漿... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 CRISPR/CAS系統(tǒng)
        1.1.1 CRISPR研究簡史
        1.1.2 CRISPR/CAS系統(tǒng)的機制
        1.1.3 基因編輯技術在轉基因豬中的應用及存在問題
    1.2 超數(shù)排卵
        1.2.1 哺乳動物卵泡形成的特點
        1.2.2 超排研究的目的和意義
        1.2.3 超排原理
        1.2.4 影響哺乳動物卵泡發(fā)生的激素
        1.2.5 影響超排效果的因素
        1.2.6 超數(shù)排卵研究進展
    1.3 PDX-1 基因的概述
        1.3.1 PDX-1 基因的結構
        1.3.2 PDX-1 基因的表達
        1.3.3 PDX-1 基因在胰腺發(fā)育中的作用
        1.3.4 PDX-1 基因缺陷豬的應用價值
2 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物和CRISPR/Cas9系統(tǒng)
        2.1.2 實驗藥品
        2.1.3 試驗中常用試劑及配制
        2.1.4 主要實驗儀器
    2.2 實驗方法
        2.2.1 實驗動物的準備
        2.2.2 超排處理
        2.2.3 胚胎回收
        2.2.4 目的基因的靶向sg RNA的設計
        2.2.5 體外合成Cas9 mRNA和sgRNA
        2.2.6 胞質注射
        2.2.7 胚胎移植
        2.2.8 受體移植懷孕判斷
        2.2.9 卵母細胞的獲取
        2.2.10 卵母細胞體外成熟
        2.2.11 I VF體外受精
        2.2.12 孤雌胚胎獲得
        2.2.13 PDX-1 基因敲除豬只的鑒定
        2.2.14 統(tǒng)計分析方法
3 結果
    3.1 超排劑量和排卵點數(shù)量的關系
    3.2 超排劑量和囊腫的數(shù)量的關系
    3.3 超排劑量和白體的數(shù)量的關系
    3.4 不同季節(jié)下對超排卵數(shù)的影響
    3.5 超排胚胎和體外獲得的孤雌、I VF、S CNT胚胎發(fā)育的差異
    3.6 胞漿注射獲得的PDX-1 缺陷豬模型的鑒定
4 討論
    4.1 超數(shù)排卵
        4.1.1 超排激素類型對超排結果的影響
        4.1.2 超排劑量對超排結果的影響
        4.1.3 前列烯醇在超排中的作用
        4.1.4 季節(jié)因素對超排的影響
    4.2 PDX-1 基因敲除豬
        4.2.1 目的基因的選擇和基因敲除動物的制備方法
        4.2.2 基因敲除動物的鑒定與檢測
5 結論
致謝
參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文



本文編號：3219857