目的:研究靶向白介素6（interleukin 6,IL-6）基因慢病毒介導RNA干擾治療小鼠膠原誘導性關(guān)節(jié)炎（collagen induced arthritis,CIA）的效果及進一步探索IL-6引發(fā)關(guān)節(jié)炎的潛在機制。方法:第一部分:構(gòu)建靶向IL-6的三條小干擾RNA（small interfering RNAs,siRNAs）,siRNAs分別轉(zhuǎn)染至小鼠巨噬細胞J774A.1內(nèi),實時熒光定量（quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR）篩選干擾效率最高的siRNA序列。根據(jù)序列構(gòu)建靶向IL-6慢病毒（LV-IL6-RNAi）顆粒,病毒顆粒感染J774A.1細胞,熒光顯微鏡下觀察確定病毒感染最佳滴度,RT-qPCR檢測病毒干擾效率。在體內(nèi),利用DBA/1小鼠構(gòu)建CIA模型。LV-IL6-RNAi組為實驗組,以空病毒（LV-NC-RNAi）為陰性對照組,甲氨蝶呤（Methotrexate,MTX）為陽性對照組,分組注射治療后進行CIA關(guān)節(jié)炎評分。酶聯(lián)免疫吸附實驗（enzyme-linked immunosorben... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

靶向IL-6的高效siRNA篩選

青島大學碩士學位論文9圖2慢病毒顆粒感染J774A.1細胞滴度篩眩A.200×放大倍數(shù)鏡下，自上而下當MOI=1，10，100時，J774A.1細胞表達GFP的情況（為明場與激發(fā)光波長488nm暗場的疊加顯示）；B.J774A.1細胞不同MOI值下被感染表達GFP數(shù)量。實驗獨立重復至少3次，數(shù)據(jù)用Mean±S.E.M表示，*P＜0.05。

結(jié)果10圖3LV-IL6-RNAi和LV-NC-RNAi分別感染J774A.1細胞，兩組細胞IL-6、IL-1β和TNF-ɑ的mRNA表達水平。實驗獨立重復至少3次，數(shù)據(jù)用Mean±S.E.M表示，*P＜0.05。2靶向IL-6慢病毒顆粒顯著減少CIA小鼠關(guān)節(jié)炎評分LV-IL6-RNAi和LV-NC-RNAi經(jīng)小鼠關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射及MTX經(jīng)小鼠腹腔內(nèi)注射后，行每日觀察記錄小鼠狀況，進行關(guān)節(jié)炎評分。評分結(jié)果顯示：LV-IL6-RNAi、LV-NC-RNAi和MTX組小鼠均在d28至d35內(nèi)開始發(fā)病，d35后，LV-IL6-RNAi組小鼠關(guān)節(jié)炎評分出現(xiàn)下降，直到d42，三組關(guān)節(jié)炎評分為10.29±0.64，5.43±0.37，7.14±0.51和LV-IL6-RNAi組的關(guān)節(jié)炎評分顯著的低于LV-NC-RNAi組和MTX組（F=22.49，P<0.01），差異具有統(tǒng)計學意義，見圖4。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]HSV-1型載體介導IL-1Rα關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射治療兔膝關(guān)節(jié)炎[J]. 吳儀,李建明,孔瑛,陳丁,劉博,王萬春.  中南大學學報(醫(yī)學版). 2013(06)
[2]白細胞介素1受體拮抗蛋白間接體內(nèi)轉(zhuǎn)基因抑制骨關(guān)節(jié)炎軟骨破壞[J]. 郭萬首,馬麗,李子榮.  中華醫(yī)學雜志. 2004(10)



本文編號：3213623