發(fā)布時(shí)間：2021-05-31 17:30

　　隨著人類(lèi)對(duì)海產(chǎn)品需求量的增大,海水養(yǎng)殖發(fā)展不斷加速,而伴隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展,沿海工業(yè)化也愈發(fā)迅速,導(dǎo)致海水養(yǎng)殖環(huán)境不斷惡化,而近海水域的生態(tài)環(huán)境對(duì)貝類(lèi)養(yǎng)殖業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展至關(guān)重要。因此,研究海洋貝類(lèi)的免疫生物學(xué)機(jī)制將為其健康養(yǎng)殖提供重要理論依據(jù)。厚殼貽貝（Mytilus coruscus）作為濾食性動(dòng)物,分布廣泛,生長(zhǎng)能力強(qiáng),但活動(dòng)能力差,在日常環(huán)境中廣泛接觸海洋環(huán)境中各種病原微生物,但由此引發(fā)的疾病感染并不多見(jiàn),說(shuō)明其體內(nèi)存在較強(qiáng)的抗菌感染機(jī)制,因此研究厚殼貽貝的天然免疫防御機(jī)制將為其健康養(yǎng)殖提供重要理論參考。白細(xì)胞介素1受體相關(guān)激酶（IRAKs）是Toll樣受體（TLR）介導(dǎo)的信號(hào)通路的重要接頭分子,在生物的天然免疫系統(tǒng)中起重要作用。因此,本論文對(duì)厚殼貽貝TLR信號(hào)通路中的免疫因子IRAK進(jìn)行了鑒定、系統(tǒng)進(jìn)化分析及相關(guān)表達(dá)機(jī)制和體外蛋白表達(dá)研究,主要取得的研究結(jié)果如下:1.本文基于厚殼貽貝轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),獲得了白細(xì)胞介素1受體相關(guān)激酶a（命名為McIRAK-a,GenBank登錄號(hào):MK592614）和b（命名為McIRAK-b,GenBank登錄號(hào):MK592615）的cDNA全長(zhǎng)序列,McI... 

【文章來(lái)源】：浙江海洋大學(xué)浙江省

【文章頁(yè)數(shù)】：75 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

厚殼貽貝鰓組織RNA凝膠電泳圖

第二章厚殼貽貝IRAK-a基因克隆與序列分析192.3結(jié)果與討論2.3.1RNA提取結(jié)果實(shí)驗(yàn)通過(guò)Trizol法成功提取厚殼貽貝的鰓組織得RNA，將獲得的RNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳用紫外凝膠成像系統(tǒng)分析條帶。如圖2-1，28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA條帶都很明顯，微量核酸蛋白檢測(cè)儀對(duì)總RNA濃度和質(zhì)量的檢測(cè)顯示，OD260/280比值均處于1.8-2.1之間，OD260/230處在2.0-2.4之間，提示此法適用于厚殼貽貝總RNA的提取，并可以用于cDNA第一鏈合成。圖2-1厚殼貽貝鰓組織RNA凝膠電泳圖Fig2.1ResultsofelectrophoreticdetectionofRNAfromgillstissueofM.coruscus2.3.2McIRAK-a核心片段擴(kuò)增結(jié)果以McIRAK-a核心片段設(shè)計(jì)的引物進(jìn)行溫度梯度PCR擴(kuò)增，所得目的片段約700bp，符合預(yù)期設(shè)計(jì)片段大小，割膠回收后，送公司測(cè)序，并將送測(cè)結(jié)果在NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中比對(duì)，結(jié)果顯示為目標(biāo)序列（圖2-2）。圖2-2McIRAK-a核心片段PCR產(chǎn)物注：M表示DNAMarkerDL1000Fig2.2McIRAK-acorefragmentPCRproductNote:MmeansDNAMarkerDL1000

第二章厚殼貽貝IRAK-a基因克隆與序列分析21圖2-3A厚殼貽貝IRAK-a的全長(zhǎng)序列分析注：起始密碼子ATG用黑色線框表示，終止密碼子TAA用星號(hào)*表示。下劃線標(biāo)注的為IRAK-a結(jié)構(gòu)域。灰色區(qū)域表示蛋白激酶ATP結(jié)合位點(diǎn)和絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶的活性位點(diǎn)。綠色，藍(lán)色和黃色分別表示絲氨酸位點(diǎn)，酪氨酸位點(diǎn)和蘇氨酸位點(diǎn)。Fig2.3AFull-lengthsequenceanalysisofIRAK-ainM.coruscusNote:ThestartcodonATGisindicatedbyablackwireframe,andthestopcodonTAAisindicatedbyanasterisk*.TheIRAK-adomainisunderlined.ThegrayareaindicatestheproteinkinaseATPbindingsiteandtheactivesiteofserine/threonineproteinkinase.Green,blueandyellowindicateserine,tyrosineandthreoninesites,respectively.

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3208665