水通道蛋白（aquaproin,AQP）是一類高度保守的蛋白質(zhì),具有一定的選擇性和較高的水分滲透性,其相對分子質(zhì)量一般在23-3120Ku之間,屬于膜內(nèi)在蛋白（major20instrinsic20protein,MIPs）超家族,廣泛存在于植物、動物、微生物等各類生物體中,目前在這些生物體內(nèi)已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了150多種MIP。對植物體內(nèi)水分運輸、小分子溶質(zhì)、氣體和重金屬的運輸、根的水分吸收、細(xì)胞的伸長與分化、植物生殖生長等多種生理過程均有重要的調(diào)節(jié)作用。在逆境脅迫的條件下,植物水通道蛋白也能對非生物脅迫作出應(yīng)答,包括鹽脅迫、干旱脅迫、冷脅迫和重金屬脅迫等非生物脅迫。本實驗是以胡楊、毛白楊和煙草為材料,對胡楊A(yù)QP蛋白基因Pe20TIP1;2進(jìn)行克隆,并對Pe20TIP1;2基因的轉(zhuǎn)基因植物在重金屬脅迫、鹽脅迫和干旱脅迫等條件下的調(diào)控作用進(jìn)行研究,同時對35Spro::Pe20TIP1;2-RNAi載體構(gòu)建和基因敲除進(jìn)行探究,然后也通過擬南芥原生質(zhì)體對Pe20TIP1;2蛋白進(jìn)行亞細(xì)胞定位,最后還研究克隆了Pe20TIP1;2啟動子,構(gòu)建Pe20TIP1;2pro::GUS植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化楊樹... 

【文章來源】：西南科技大學(xué)四川省

【文章頁數(shù)】：97 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第一章 緒論
    1.1 水通道白
        1.1.1 水通道蛋白的發(fā)現(xiàn)
        1.1.2 水通道蛋白的家族成員
        1.1.3 水通道蛋白的結(jié)構(gòu)
        1.1.4 水通道蛋白的功能
            1.1.4.1 水通道蛋白與植物根系和葉片中的水分運輸
            1.1.4.2 水通道蛋白對礦物質(zhì)吸收
            1.1.4.3 水通道蛋白與植物發(fā)育
            1.1.4.4 植物激素
            1.1.4.5 水通道蛋白和非生物脅迫的抗性
    1.2 RNA干擾(RNAinterference,RNAi)簡介
    1.3 本研究的目的與意義
    1.4 主要研究內(nèi)容和技術(shù)路線
        1.4.1 主要的研究內(nèi)容
        1.4.2 實驗技術(shù)路線圖
第二章 實驗材料與方法
    2.1 實驗材料
    2.2 實驗質(zhì)粒和菌株
    2.3 實驗試劑
    2.4 實驗方法
        2.4.1 生物信息學(xué)分析
        2.4.2 總DNA的提取和純化
        2.4.3 總RNA的提取
        2.4.4 DNA的合成
        2.4.5 基因擴(kuò)增
        2.4.6 PCR擴(kuò)增產(chǎn)物膠回收純化
        2.4.7 感受態(tài)細(xì)胞制備過程
        2.4.8 T載體構(gòu)建與轉(zhuǎn)化
        2.4.9 菌液PCR陽性驗證及質(zhì)粒提取
        2.4.10 酶切驗證和測序
        2.4.11 重組質(zhì)粒的構(gòu)建
        2.4.12 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌
        2.4.13 農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化和植株陽性驗證
            2.4.13.1 轉(zhuǎn)化楊樹和煙草
            2.4.13.2 轉(zhuǎn)基因植株陽性驗證
            2.4.13.3 實時熒光定量PCR(Real-TimePCR)
        2.4.14 GUS染色實驗
            2.4.14.1 GUS染色底物的配制
            2.4.14.2 染色步驟
        2.4.15 亞細(xì)胞定位實驗
            2.4.15.1 實驗溶液
            2.4.15.2 擬南芥原生質(zhì)體的制備以及瞬時表達(dá)
        2.4.16 煙草實驗方法
            2.4.16.1 煙草培養(yǎng)
            2.2.16.2 根長處理
            2.2.16.3 H_2O_2活體原位檢測
            2.2.16.4 生理數(shù)據(jù)測定
        2.4.17 數(shù)據(jù)處理與分析
第三章 實驗結(jié)果與分析
    3.1 生物信息學(xué)分析
    3.2 胡楊PeTIP1;2基因的組織表達(dá)分析
    3.3 過表達(dá)載體構(gòu)建和轉(zhuǎn)基因植株鑒定
        3.3.1 目的基因PeTIP1;2基因的克隆
        3.3.2 轉(zhuǎn)基因楊樹陽性鑒定
        3.3.3 轉(zhuǎn)基因煙草過表達(dá)植物鑒定
    3.4 轉(zhuǎn)基因煙草對不同逆境的響應(yīng)
        3.4.1 轉(zhuǎn)基因煙草在Mannitol(甘露醇)脅迫下的生長情況
        3.4.2 轉(zhuǎn)基因煙草在NaCl脅迫下的生長情況
        3.4.3 轉(zhuǎn)基因煙草在CuSO4·5H2O脅迫下的生長情況
    3.5 RNAi表達(dá)載體構(gòu)建和轉(zhuǎn)基因植株鑒定
        3.5.1 RNAi表達(dá)載體構(gòu)建
        3.5.2 轉(zhuǎn)基因植株鑒定
    3.6 胡楊PeTIP1;2基因亞細(xì)胞定位分析
        3.6.1 引物設(shè)計與載體構(gòu)建
        3.6.2 胡楊PeTIP1;2亞細(xì)胞定位結(jié)果
        3.6.3 PeTIP1;2基因啟動子的克隆及組織定位
            3.6.3.1 PeTIP1;2基因啟動子序列分析
            3.6.3.2 胡楊啟動子的克隆
            3.6.3.3 胡楊啟動子在毛白楊中異源表達(dá)陽性鑒定
            3.6.3.4 胡楊proTIP1;2異源表達(dá)毛白楊的GUS染色分析
        3.6.4 轉(zhuǎn)基因毛白楊處理后GUS結(jié)果分析
第四章 討論及展望
    4.1 結(jié)論
    4.2 討論
    4.3 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
附錄
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的與學(xué)術(shù)論文相關(guān)論文



本文編號：3178295