棉大卷葉螟Sylepta derogata屬于鱗翅目螟蛾科,是棉花等經(jīng)濟作物上的主要害蟲,以幼蟲吐絲卷葉為害棉花,近些年關(guān)于該蟲危害棉花等經(jīng)濟作物的研究報道逐漸增多。本文為了探討該蟲吐絲的內(nèi)在分子機制,以它的絲素輕鏈基因SdFib為研究目標,在克隆得到其cDNA片段和全長的基礎(chǔ)上,采用RNAi技術(shù)干擾SdFib,分析干擾SdFib后對棉大卷葉螟幼蟲絲的形貌結(jié)構(gòu)、力學(xué)性能和氨基酸種類與含量等以及對該蟲生長發(fā)育的影響,系統(tǒng)驗證了SdFi 的功能。研究結(jié)果如下:根據(jù)已經(jīng)測序登記的其他昆蟲絲素輕鏈基因的保守區(qū)域設(shè)計引物,通過RT-PCR克隆得到SdFib基因636 bp的cDNA片段。多重序列比對分析發(fā)現(xiàn),SdFib與外米綴蛾Corcyra cephalonica同源基因的氨基酸相似性最高,達到71%,和大蠟螟GalleRia mellonella與家蠶Bombyx mori同源基因的氨基酸相似性分別為70%和67%。采用飼喂法,結(jié)合體外合成dsSdFib和大腸桿菌發(fā)酵法構(gòu)建dsSdFib載體,分別分析了不同濃度dsSdFib處理和不同的飼喂時間對棉大卷葉螟SdFib表達量的影響。在充分驗證得... 

【文章來源】：揚州大學(xué)江蘇省

【文章頁數(shù)】：109 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

圖１－１絲蛋白分子構(gòu)象示意圖??－ｒｍａｉｏｎ?ｏｆ?ｓｉｌｋｒｏｔｅｉｎ??

?２．３結(jié)果與分析??對挑取的１５個單菌落進行過夜培養(yǎng)，菌液ＰＣＲ檢測（圖２－１）可知，由引物順??利擴增出條帶，由圖２－２可以看出，膠回收都成功獲得所需要的目的條帶。從圖２－３??所示，成功地克隆到棉大卷葉螟絲素輕鏈基因片段，順利進行測序，其長度為６３６?ｂｐ。??最終獲得如圖２－４所７Ｋ的氣基酸序列。??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２?１３?１４?１５??ｉ｜??Ｉ，．國??圍義圓＿圓??Ｌ…ｍ…＇１??圖２－１菌落ＰＣＲ擴增基因插入檢測結(jié)果??Ｆｉｇ?２－１?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔａｒｇｅｔ?ｉｎｓｅｒｔｅｄ

：：…??Ｓ纖??圖２－２膠回收結(jié)果??Ｆｉｇ?２－２?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｇｅｌ?ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ??注：Ｍ為ＤＬ２０００；?１－２為重復(fù)??Ｍ?１?２?３?４?５?６?７?８?９?１０?１１?１２??ｂｐ?，??ｉ??丨ｅ：?ｒ??圖２－３使用Ｆｉｂ－Ｆ和Ｆｉｂ－Ｒ引物菌落ＰＣＲ結(jié)果??Ｆｉｇ?２－３?Ｃｏｌｏｎｙ?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉａｔｉｏｎ?ｕｓｉｎｇ?Ｆｉｂ－Ｆ?ａｎｄ?Ｆｉｂ－Ｒ?ｐｒｉｍｅｒｓ??注．？?Ｍ為ＤＬ２０００；?１－１２為挑取的菌落重復(fù)??

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3132400