發(fā)布時間：2021-04-09 21:49

　　目的建立肝特異性G6PC基因純合缺陷的Ia型糖原累積癥（glycogen storage disease Ia, GSD Ia）小鼠模型。方法通過CRISPR/Cas9基因重組技術使C57BL/6J小鼠受精卵中G6PC基因外顯子2兩側分別插入1個loxP原件,產仔后經鑒定打靶成功的小鼠通過擴繁、兄妹交配及與Alb-Cre小鼠交配,最終產生G6PC-loxP^+/+、Alb-Cre共表達的肝特異性G6PC基因2號外顯子純合敲除的GSD Ia小鼠模型。通過監(jiān)測模型鼠及背景鼠的餐后0～12 h的血糖來驗證模型是否成功。結果經PCR鑒定F0及F1代小鼠成功于G6PC基因2號外顯子兩側插入loxP原件并可穩(wěn)定遺傳;最終成功建立G6PC-loxP^+/+、Alb-Cre共表達的GSD Ia小鼠,檢測餐后1～12 h血糖均低于背景鼠,說明造模成功。結論應用CRISPR/Cas9基因重組技術及l(fā)oxP-Cre系統可建立肝特異性G6PC基因缺陷的GSD Ia小鼠,可用于該病的病理研究及藥物研發(fā)。 

【文章來源】：北京醫(yī)學. 2020,42(11)

【文章頁數】：5 頁

【部分圖文】：

中靶載體示意圖

Lei等[3]于1996年報道了全身型G6PC基因3號外顯子敲除純合缺陷小鼠的制備過程，但該小鼠病情嚴重，壽命過短，大多數存活至斷奶，存活超過5周齡的小鼠不足12%，不適于藥物研發(fā)及長期觀察。2009年，Peng等[4]報道了應用胚胎干細胞DNA同源重組技術，利用EIIa-Cre-loxP與FLPe-Frt策略制備的G6PC3號外顯子條件無效小鼠模型；可引起腎、肝特異性缺乏G6P，存活時間可長達10～20個月[5]。2010年，Mutel等[6]應用ERT2-Cre-loxP系統制備了肝特異性G6PC 3號外顯子條件無效小鼠模型，存活超過18個月。條件無效小鼠模型存活時間長，較適于藥物研發(fā)。本研究團隊曾經嘗試應用文獻中報道的Cre-loxP策略復制條件無效小鼠模型，但造模失敗。最終選擇應用CRISPR/Cas9技術在G6PC基因中插入loxP元件，進而通過Alb-Cre-loxP策略制備了肝特異性G6PC 2號外顯子純合敲除的GSD Ia小鼠。圖3 G6Pase LKO小鼠及背景鼠禁食后血糖-時間監(jiān)測圖

G6Pase LKO小鼠及背景鼠禁食后血糖-時間監(jiān)測圖


本文編號：3128372