發(fā)布時間：2021-03-29 04:55

　　研究背景和目的胃癌（Gastric Cancer,GC）是我國常見惡性腫瘤,盡管近年來在胃癌的診斷和治療上取得一定進步,但我國GC的發(fā)病率與死亡率仍位居前列。從分子層面上探究胃癌發(fā)生、發(fā)展將有助于尋找到新的治療突破點。EphB6是酪氨酸激酶（receptor tyrosine kinases,RTKs）家族中一種缺乏酪氨酸激酶活性的特殊型受體。目前國內(nèi)外大量研究提示EphB6在大部分腫瘤中呈現(xiàn)低表達,可能發(fā)揮著抑癌基因功能。但是EphB6在胃癌中的研究尚少,本課題前期通過對胃癌患者外周血樣本ctDNA高通量測序,發(fā)現(xiàn)多例EphB6基因高頻突變�；谇捌谘芯�,我們以胃癌為研究對象,將EphB6作為目的基因,明確EphB6在胃癌組織和胃癌細胞株中的表達,探究可能影響EphB6基因表達的機制;構(gòu)建EphB6穩(wěn)定過表達的胃癌細胞株,觀察其對胃癌細胞增殖、侵襲轉(zhuǎn)移的影響,并初步探索相關(guān)分子機制。研究方法1.運用公共數(shù)據(jù)庫生物信息網(wǎng)站及免疫組化技術(shù)研究胃癌組織及對應(yīng)的癌旁正常組織EphB6表達情況并進一步分析EphB6蛋白表達水平與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系。2.應(yīng)用RT-PCR、Westernblo... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：82 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【圖文】：

GEPIA網(wǎng)站分析在人胃癌細胞組織中EphB6mRNA水平

20圖1.2EphB6蛋白在胃癌組織中的免疫組化染色情況（A）EphB6蛋白在癌旁組織高表達；（B）EphB6蛋白在癌組織低表達；（C）EphB6蛋白在癌組織中等表達；（D）EphB6蛋白在癌組織高表達。（×100）表1.1胃癌組織EphB6蛋白染色評分情況(x±s)組織類型綜合評分t值P值癌組織2.2895±1.575284.717<0.001癌旁組織3.9474±1.558713.3EphB6蛋白的表達與患者臨床數(shù)據(jù)的關(guān)系將38例胃癌組織及對應(yīng)的癌旁正常組織的EphB6染色綜合評分進行比較，25例（65.8%）出現(xiàn)了EphB6蛋白表達下調(diào)，未下調(diào)的僅13例（34.2%，其中11例無變化，2例表達上調(diào)）。將EphB6蛋白表達的下調(diào)與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系進行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果如表1.2所示，EphB6蛋白表達下調(diào)與胃癌分化程度（P=0.042<0.05）、有無脈管癌栓（P=0.013<0.05）有相關(guān)性，但與患者性別（P=0.486）、年齡（P=0.323）、腫瘤

29（9）取1μgRNA于1﹪瓊脂糖凝膠電泳鑒定RNA的完整性。當顯示18s、28s和5s三條擴增帶，亦說明提取的RNA完整性好，結(jié)果見下圖圖2.1RNA電泳圖2.2.2cDNA第一鏈的合成（1）按北京天根逆轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書操作，配制gDNA去除反應(yīng)體系，徹底混勻。簡短離心，并置于42℃，孵育3min。然后置于冰上放置；組分使用量TotalRNA1μg5×gDNABuffer2μlRNaseFreedH2OUpto10μl（2）配制反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)體系；組分使用量10×FastRTBuffer2μlRTEnzymeMix1μlFQ-RTPrimerMix2μlRNaseFreedH2OUpto10μl（3）將反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中的Mix，加到gDNA去除步驟的反應(yīng)液中，充分混勻；（4）反應(yīng)條件：42℃孵育15min，95℃孵育3min之后放于冰上，得到cDNA可用于后續(xù)實驗。2.2.3qPCR引物設(shè)計與合成

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3106940