豆科植物-根瘤菌共生固氮系統(tǒng)是生物固氮中效率最高的體系,無論對(duì)全球氮生態(tài)循環(huán)還是農(nóng)業(yè)都極為重要。自然或農(nóng)業(yè)生產(chǎn)條件下,豆科植物-根瘤菌共生固氮系統(tǒng)會(huì)不斷遭受著逆境脅迫。長(zhǎng)期以來,研究多集中在可控環(huán)境下的根瘤菌結(jié)瘤與固氮機(jī)制,以及豆科植物或者根瘤菌單方面對(duì)逆境的生理生化響應(yīng)過程。作為具有緊密共生關(guān)系的根瘤菌是否以及如何幫助植物宿主抵抗不良環(huán)境仍然不清楚。深入理解大豆慢生型根瘤菌在大豆應(yīng)答干旱脅迫傷害,適應(yīng)性變化等過程中的生物學(xué)作用,對(duì)提高農(nóng)業(yè)產(chǎn)量和保護(hù)生態(tài)環(huán)境具有非常重要的意義。本研究以大豆慢生型根菌Bradyrhizobium diazoefficiens USDA110為研究對(duì)象,采用Tn5轉(zhuǎn)座誘變技術(shù),建立突變體庫,篩選脅迫環(huán)境條件型突變體,并初步探究了這些篩選突變菌株的生理生化、遺傳以及共生特征。（1）探究了野生體B.d110在三種脅迫環(huán)境（pH、NaCl和干旱）條件下的生長(zhǎng)模式,生長(zhǎng)受到明顯抑制（臨界生長(zhǎng)）時(shí)的脅迫條件分別是pH4.0、0.4%NaCl和12%PEG6000。以此為脅迫條件的大豆（綏農(nóng)14號(hào)）接種實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,相較于非脅迫條件,無論接種與否,三種脅迫條件均顯著降... 

【文章來源】：蘭州大學(xué)甘肅省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

本研究所用mini-Tn5SSgusA20結(jié)構(gòu)

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 大豆慢生型根瘤菌突變體庫構(gòu)建及參與環(huán)境脅迫相關(guān)基因的挖掘1.2.2 Tn5 轉(zhuǎn)座子的作用機(jī)制Tn5 轉(zhuǎn)座子的轉(zhuǎn)座是非復(fù)制型的，步驟復(fù)雜，它可以從遺傳物質(zhì)的一部分跳躍到另一部分，從而引起遺傳變異。首先需要轉(zhuǎn)座酶（tnp）結(jié)合到 Tn5 的 OE末端，tnp 才具有切割 DNA 的活性[30]。tnp 結(jié)合到 Tn5 后，對(duì)轉(zhuǎn)座子 DNA 鏈的一端進(jìn)行切割，然后在 tnp 的活化作用下，形成平末端的 Tn5，最后整體離開供體鏈，結(jié)合到靶 DNA，然后在 DNA 聚合酶的作用下補(bǔ)平供體鏈和受體 DNA 的缺口[31]（圖 1.3）。

蘭州大學(xué)碩士學(xué)位論文 大豆慢生型根瘤菌突變體庫構(gòu)與環(huán)境脅迫相關(guān)基因的挖于高溫滅菌的 10ml 添加壯觀霉素 Spcr100 的 LB 液體培養(yǎng)基，37℃，180r過夜培養(yǎng)（推遲 3 天培養(yǎng)）。2.接合階段：（1）分別吸取第一步培養(yǎng)的兩種菌 2-4ml，離心棄上清，滅菌水徹底（2）清洗抗生素三次，第三次用 500μl滅菌水懸濁。（3）分別取 300μl以上兩種菌在 1.5ml 的離心管中混合，離心，棄去上清液，剩余液體懸濁菌體，此為混合菌液。（4）無菌濾膜放置在無抗的 HM 固體平板上，各吸取步驟（2）清洗體菌和受體菌 50ul 以及步驟（3）的混合菌液 50μl分別滴加在濾膜上各三（5）30℃培養(yǎng)至 3-4 天。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]近10年中國(guó)大陸主要糧食作物氮肥利用率分析[J]. 于飛,施衛(wèi)明.  土壤學(xué)報(bào). 2015(06)
[2]大豆生理生態(tài)干旱脅迫影響研究進(jìn)展[J]. 崔維佳,常志云,李寧,張曉慶.  安徽農(nóng)業(yè)科學(xué). 2012(25)
[3]一株Zn抗性菌株的篩選鑒定及吸附條件優(yōu)化[J]. 李慧芬,林雁冰,王娜娜,郭軍康,韋革宏.  環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào). 2010(11)
[4]豆科植物共生結(jié)瘤的分子基礎(chǔ)和調(diào)控研究進(jìn)展[J]. 丑敏霞,魏新元.  植物生態(tài)學(xué)報(bào). 2010(07)
[5]Tn5轉(zhuǎn)座突變技術(shù)在革蘭氏陰性細(xì)菌分子遺傳研究中的應(yīng)用[J]. 年洪娟,陳麗梅,李昆志.  中國(guó)生物工程雜志. 2009(12)
[6]細(xì)菌生物膜的形成與調(diào)控機(jī)制[J]. 唐俊妮,史賢明,王紅寧,周銳.  生物學(xué)雜志. 2009(02)
[7]農(nóng)桿菌雙組分信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)中VirG蛋白結(jié)構(gòu)與轉(zhuǎn)化功能的分析[J]. 嚴(yán)禮,夏立秋,丁學(xué)知.  生命科學(xué)研究. 2008(04)
[8]我國(guó)南北大豆產(chǎn)區(qū)慢生大豆根瘤菌的遺傳多樣性和系統(tǒng)發(fā)育研究[J]. 張偉濤,楊江科,袁天英,周俊初.  微生物學(xué)報(bào). 2006(01)
[9]轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)的鑒定方法[J]. 王瑞白,闞飆.  生物技術(shù)通訊. 2005(03)
[10]生態(tài)環(huán)境對(duì)根瘤菌競(jìng)爭(zhēng)結(jié)瘤影響的研究進(jìn)展[J]. 何慶元,胡艷,玉永雄.  大豆科學(xué). 2004(01)

博士論文
[1]甘肅寒旱區(qū)苜蓿根瘤菌促生能力影響因子分析及高效促生菌株篩選研究[D]. 師尚禮.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué) 2005

碩士論文
[1]水稻細(xì)菌性條斑病菌Tn5突變體的表型篩選與突變位點(diǎn)定位[D]. 盧香濃.廣西大學(xué) 2013
[2]AMF對(duì)常見經(jīng)濟(jì)植物資源利用效率的促進(jìn)作用研究[D]. 徐亞男.哈爾濱工業(yè)大學(xué) 2012
[3]應(yīng)用基因芯片技術(shù)篩選野生大豆耐鹽堿基因及功能研究[D]. 吳振敏.吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 2008
[4]高效苜蓿根瘤菌株的篩選[D]. 鐘文文.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3102843