發(fā)布時間：2021-03-19 12:51

　　雄性不育是自花和常異花授粉作物利用雜種優(yōu)勢的最重要、最有效途徑,小麥雜種優(yōu)勢能否廣泛利用在很大程度上取決于人們對小麥不同類型雄性不育的認識與理解。小麥雄性不育類型很多,有核不育、核質(zhì)互作不育、光溫敏不育等。我國小麥生產(chǎn)上小有利用的是光溫敏雄性不育,研究小麥光溫敏雄性不育的遺傳及調(diào)控機制將拓展人們對小麥雄性不育的認識與理解,擴大小麥雜種優(yōu)勢利用。本研究對小麥光溫敏雄性不育系337S短日低溫不育條件下顯著上調(diào)表達的幾個基因進行了克隆,利用Gateway技術構建了其中三個候選基因Ta MS337S-3、Ta MS337S-4、Ta MS337S-5的超表達載體,利用基因槍介導法和農(nóng)桿菌介導法對小麥不同品種幼胚進行了遺傳轉(zhuǎn)化,對轉(zhuǎn)基因陽性苗進行了表型差異分析,同時將三個候選基因在擬南芥中進行了遺傳轉(zhuǎn)化和基因功能分析,主要結果如下:1.基因槍介導的小麥幼胚遺傳轉(zhuǎn)化:華麥2152為受體材料轉(zhuǎn)Ta MS337S-3基因共獲得了59株抗性苗,PCR檢測其中有13株陽性苗;華麥2566為受體材料轉(zhuǎn)Ta MS337S-5基因共獲得了46株抗性苗,PCR檢測其中有9株陽性苗;科農(nóng)199受體材料轉(zhuǎn)Ta MS3... 

【文章來源】：華中農(nóng)業(yè)大學湖北省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

基因槍介導的小麥遺傳轉(zhuǎn)化過程

圖 3 再生苗的生長繁殖Fig. 3 Growth and reproduction of regenerated seedlings注：A：轉(zhuǎn)基因小穗；B：轉(zhuǎn)基因種子；C：T1 代幼苗；D：T1 代陽性苗: A: Transgenic spikelet; B: Transgenic seed; C: T1 generation seedlings; D: T1 genpositive vaccine槍介導小麥遺傳轉(zhuǎn)化數(shù)據(jù)統(tǒng)計因槍介導 TaMS337S-3 基因數(shù)據(jù)統(tǒng)計基因槍介導將 TaMS337S-3 基因?qū)肴A麥 2152 中，共獲得 13 株陽性 1.5%（表 3）。我們對華麥 2152 分兩次進行轉(zhuǎn)化，為保持相近的轉(zhuǎn)第二次轉(zhuǎn)化相距第一次約晚一周左右，但實驗結果表明第二次轉(zhuǎn)化率4%左右，推測可能由于侵染時間過晚，愈傷組織狀態(tài)不好，導致轉(zhuǎn)化，第二次轉(zhuǎn)化過程中污染嚴重，雖然及時繼代轉(zhuǎn)移培養(yǎng)基，但是損傷，導致綠點數(shù)明顯減少。表 3 基因槍介導 TaMS337S-3 基因轉(zhuǎn)化統(tǒng)計表

本研究中的華麥系列品種華麥 2566 是一個良好的遺傳轉(zhuǎn)化材料。表 4 基因槍介導 TaMS337S-5 基因轉(zhuǎn)化統(tǒng)計表Table 4 The stastics of embryos with TaMS337S-5 by gene gun小麥品種 轉(zhuǎn)化愈傷數(shù) 帶綠點愈傷數(shù) 分化率% 抗性苗數(shù) PCR 陽性苗數(shù) 轉(zhuǎn)化率%華麥 2566 802 536 66.8 46 9 1.12科農(nóng) 199 800 250 31.25 39 2 0.252.2.3 基因槍介導法轉(zhuǎn)化 T0 代抗性苗 PCR 檢測結果利用基因槍介導法共獲得了 140 多株抗性苗，對 140 多份樣品提取 DNA 進行PCR 特異性擴增，將初次檢測出來條帶較亮的株系，進行重復鑒定與核實。圖 4 是華麥 2152 轉(zhuǎn) TaMS337S-3 基因 PCR 檢測結果。本實驗是以標記基因潮霉素抗性基因 HPTⅡ的 PCR 特異擴增檢測，其中泳道 j、l 并沒有條帶出現(xiàn)說明是陰性苗；f、h、g、k、m、n、o、r、s、t 條帶較陽性對照弱；泳道 d、e、i、p、q 條帶較亮，可以初步認為是華麥 2152 品種轉(zhuǎn) TaMS337S-3 基因的陽性株系。

【參考文獻】：
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本文編號：3089598