剛毛檉柳ThABF2基因耐鹽功能研究
發(fā)布時(shí)間：2021-03-05 07:43
ABF/AREB（ABRE-binding facto/ABA-response element binding factor）蛋白是廣泛存在于植物中的一類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子,屬于bZIP類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子的A亞族,主要在植物生長(zhǎng)發(fā)育等方面具有重要的作用。本研究從剛毛檉柳（Tamarix hispida）轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)中鑒定出一條可能與鹽脅迫應(yīng)答相關(guān)的ABF基因,命名為T(mén)hABF2,該基因開(kāi)放讀碼框（ORF）全長(zhǎng)1110 bp,編碼370個(gè)氨基酸,相對(duì)分子質(zhì)量82.3kDa,理論等電點(diǎn)（PI）為5.02。構(gòu)建pBI121-GFP-ThABF2載體,亞細(xì)胞定位結(jié)果表明ThABF2蛋白定位在細(xì)胞核中。構(gòu)建pGBKT7-ThABF2載體,轉(zhuǎn)化Y2H酵母感受態(tài)細(xì)胞,通過(guò)SD/-Trp/-His/-Ade/X-α-Gal培養(yǎng)基篩選檢測(cè)顯示ThABF2轉(zhuǎn)錄因子具有轉(zhuǎn)錄激活活性。為了研究ThABF2基因的耐鹽功能,構(gòu)建了重組pROKⅡ-ThABF2和pFGC5941-ThABF2基因,進(jìn)行剛毛檉柳瞬時(shí)轉(zhuǎn)化以獲得瞬時(shí)過(guò)表達(dá)和抑制表達(dá)ThABF2基因剛毛檉柳苗,同時(shí)以pROKII瞬時(shí)侵染剛毛檉柳作為對(duì)照。在NaCI脅迫下,分...
【文章來(lái)源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖２－１?ＰＣＲ擴(kuò)增基因??
ａ?（ＸＰ＿０１５８７６２６２．１）；?ＣｃＡＢＦ：?Ｔ＾Ｓ?Ｃａｊａｎｕｓ?ｃａｊａｎ?（ＸＰ＿０２０２３１８７８．１）；?ＭｄＡＢＦ＇Ｍ％．?Ｍａｌｕｓ??（ｉ■咖７？ｃ＾（Ｒ＾Ｈ２３７５５？ｌ）；Ｃ７”Ｊ５Ｆ：南瓜Ｃｗ（：ｗｒ６／／＾７ｗａｓｃ／２＾７＾７（ＸＰ＿０２２２３２７３２？ｌ）；ＱＬ４及Ｆ：小果咖啡??（ＸＰ＿０２７０７２７２８．１）；?芝麻?ｚ＞＾／ｃｗｍ?（ＸＰ＿０１１０６２２８５．１）；粗線(xiàn)框部分為?４??個(gè)保守的磷酸化位點(diǎn)（Ｃ１－Ｃ４）和ｂＺＩＰ結(jié)構(gòu)域??圖２－４?ＡＢＦ蛋白的多序列比對(duì)??＂丨丨■酬■■…—－????ＣｍＡＢＦ????ＺｊＡＢＦ????Ｉ??Ｐ＞ｂＡＢＦ????１????ＭｄＡＢＦ???－?ＣｃＡＢＦ????ＳＩＡＢＦ????ｐ－—＂－＂—＂＂—＂＂—＂＂＂＂—?｜??ＮｓＡＢＦ????Ｉ??ＣａＡＢＦ???ＡＨｉＡＢＦ２????＿■＿＿■丨丨關(guān)ＳｏＡＢＦ????ｆ?????ＢｖＡＢＦ??１?ＣｑＡＢＦ??圖２－５幾種ＡＢＦ植物蛋白同源序列的系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析??＿１５＿??
?東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文???２．３．４剛毛檉柳基因的亞細(xì)胞定位??成功構(gòu)建含ＧＦＰ載體的７７？ＡＳＦ２－ＧＦＰ重組基因，利用基因槍法將７７／ＡＳＦ２－ＧＦＰ基因??和ＰＢＩ１２１－ＧＦＰ基因瞬時(shí)轉(zhuǎn)化到洋蔥表皮，其中以ＰＢＩ１２１－ＧＦＰ基因?yàn)閷?duì)照，結(jié)果如圖??２－６所示：??Ｄ?Ｅ?Ｆ??ＡＤ：?ＧＦＰ熒光場(chǎng)；ＢＥ：明場(chǎng)；ＣＦ：復(fù)合場(chǎng)??圖２－６?７ＭＳＦ２基因的亞細(xì)胞定位??從上圖中可以看到，ＰＢＩ１２卜ＧＦＰ在洋蔥表皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核中都有表達(dá)，??ＴＴ７ＡＢＦ２－ＧＦＰ只在洋蔥表皮細(xì)胞核內(nèi)有表達(dá)，表明轉(zhuǎn)錄因子定位在細(xì)胞核內(nèi)。??２．３．５?ＴｈＡＢＦ２轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄激活活性分析??２．３．５．１?ｐＧＢＫＴ７－ｍ４５Ｆ２?載體的構(gòu)建??以ｐＭＤ１８－Ｔ－質(zhì)粒為模板，ＰＣＲ擴(kuò)增帶有同源序列的的基因片段，??將該基因通過(guò)連接、轉(zhuǎn)化構(gòu)建到ＰＧＢＫＴ７載體上，選取條帶長(zhǎng)度正確且單一的菌液進(jìn)行??測(cè)序，測(cè)序結(jié)果與７７Ｍ５Ｆ２基因序列完全一致，說(shuō)明ｐＧＢｉｃｎ－ｒ／＾＾ｇｍ載體構(gòu)建成功??（如圖２－７）。??－１６－??
本文編號(hào)：3064842
【文章來(lái)源】：東北林業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校 教育部直屬院校
【文章頁(yè)數(shù)】：65 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【部分圖文】：
圖２－１?ＰＣＲ擴(kuò)增基因??
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本文編號(hào)：3064842
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