松材線蟲病是一種由松材線蟲引起的檢疫性病害。前期研究發(fā)現(xiàn),藍(lán)光可以顯著地抑制松材線蟲的胚胎發(fā)育;進(jìn)一步研究表明,在藍(lán)色光照條件下,很多與代謝有關(guān)的基因表達(dá)量顯著下調(diào),其中madd-4基因的下調(diào)幅度尤為顯著。在上述研究的基礎(chǔ)上,本文以madd-4基因?yàn)檠芯繉ο?克隆了madd-4基因,分析該基因的進(jìn)化地位;構(gòu)建了madd-4基因相應(yīng)的質(zhì)粒表達(dá)載體,通過組織原位雜交和轉(zhuǎn)基因顯微注射研究,闡明其在松材線蟲整個(gè)生命周期中的表達(dá)模式;通過RNAi技術(shù)驗(yàn)證其在胚胎期的功能作用。研究結(jié)果不僅能夠闡明madd-4基因在松材線蟲胚胎發(fā)育過程中的調(diào)控作用,為揭示光照抑制松材線蟲種群增長的機(jī)理提供基礎(chǔ),還能夠?yàn)檠兄菩滦蜌⒕�劑和設(shè)計(jì)特異性的松材線蟲病防控措施提供新的思路,同時(shí)也能為其它高等動(dòng)物的胚胎發(fā)育研究提供一定的參考。本文主要研究結(jié)果如下:一、madd-4基因在結(jié)構(gòu)上與秀麗隱桿線蟲相似,均有madd-4-long和madd-4-short兩種不同形式的轉(zhuǎn)錄本,兩種線蟲的兩個(gè)轉(zhuǎn)錄本均共享madd-4-short的第2-10個(gè)外顯子,說明該基因在兩種線蟲中可能具有相同的調(diào)控功能。二、in situ原位雜交和轉(zhuǎn)... 

【文章來源】：浙江農(nóng)林大學(xué)浙江省

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

秀麗隱桿線蟲madd-4同源異構(gòu)體與果蠅和人類同源蛋白的比較分析

圖 2 松材線蟲與秀麗隱桿線蟲 madd-4 基因結(jié)構(gòu)比較分析Figure 2 Structural Comparison of madd-4 in B. xylophilus and C. elegans利用 DNAMAN 軟件對松材線蟲 madd-4 基因所編碼的氨基酸序列與秀麗隱桿線蟲該蛋白的氨基酸序列進(jìn)行多重序列比對，發(fā)現(xiàn)兩者之間具有高度的重復(fù)性（見圖 3）進(jìn)一步暗示 madd-4 基因功能在松材線蟲和秀麗隱桿線蟲上可能具有高度的相似性。C. elegans madd-4

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析MADD-4 蛋白功能位點(diǎn)分析結(jié)果表明，松材線蟲和秀麗隱桿線蟲具有高度的相似性（見圖 4）。由圖 4 可以看出，松材線蟲 MADD-4A 蛋白的功能位點(diǎn)包含 7 個(gè)血小板反應(yīng)蛋白 TSP 重復(fù)基序與 1 個(gè) IG 免疫球蛋白域；松材線蟲 MADD-4B 蛋白的功能位點(diǎn)包含 5 個(gè)血小板反應(yīng)蛋白 TSP 重復(fù)基序與 1 個(gè) IG 免疫球蛋白域，MADD-4A和 MADD-4B 均不含 PLAC 結(jié)構(gòu)域，這與模式線蟲 MADD-4 蛋白的功能位點(diǎn)存在很高的相似性，進(jìn)一步表明 MADD-4 蛋白的功能在松材線蟲和秀麗隱桿線蟲上具有高度的相似性。


本文編號：3058272