目的:本研究旨在檢測隨年齡增長,人骨髓間充質(zhì)干細胞成骨能力的改變以及細胞衰老程度;通過基因芯片技術檢測不同年齡組人骨髓間充質(zhì)干細胞差異基因表達情況,為骨髓間充質(zhì)干細胞作為種子細胞在組織工程臨床轉化過程中提供理論依據(jù)。方法:1.不同年齡組人骨髓間充質(zhì)干細胞（BMSC）收集、培養(yǎng)、鑒定按照年齡分為:胎兒組（fetal-BMSC,20周-24周,n=6）,青年組（young/adult-BMSC,16歲-30歲,n=6）,老年組（old-BMSC,>60歲,n=6）,根據(jù)此年齡分組收集,分離獲得細胞。流式細胞術檢測間充質(zhì)干細胞表面標志物。對分離所得細胞進行成骨、成脂誘導分化及茜素紅、油紅O染色。2.檢測不同年齡組人骨髓間充質(zhì)干細胞成骨分化能力培養(yǎng)不同年齡組骨髓間充質(zhì)干細胞,進行成骨誘導分化2周,通過茜素紅染色鑒定間充質(zhì)干細胞成骨分化能力的變化,用Real-time PCR檢測成骨相關基因表達水平變化。3.不同年齡組人骨髓間充質(zhì)干細胞衰老程度的比較通過細胞衰老β-半乳糖苷酶染色檢測不同年齡組人骨髓間充質(zhì)干細胞衰老程度。通過Real-time PCR檢測衰老相關基因P21、P16表達變化。... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

流式細胞術檢測干細胞表面標志物

鏡下觀察未見明顯紅色結節(jié)形成，如下圖所示 �？瞻讓φ战M 誘導分化組圖 1-2 成骨誘導茜素紅染色（Bar=100 μm）成脂誘導分化培養(yǎng)兩周，鏡下觀察可見，細胞增殖速率減慢，細胞逐漸膨大，細胞形態(tài)從長梭形轉向橢圓形。隨著成脂誘導分化時間增加，倒置顯微鏡下可見細胞內(nèi)形成的脂滴數(shù)目遞增，后按前所述方式進行油紅 O 染色，成脂誘導分化組鏡下可見細胞內(nèi)脂滴被染為紅色，而成脂誘導空白對照組未見明顯脂滴形成，油紅 O 染色未觀察到被染為紅色的脂滴，如下圖所示。

天津醫(yī)科大學碩士學位論文1.2.2 分離所得細胞的成骨、成脂分化能力成骨誘導分化培養(yǎng) 14 天，逐漸開始形成鈣化結節(jié)，伴隨著成骨誘導培養(yǎng)時間增加，在顯微鏡下觀察可以發(fā)現(xiàn)鈣化結節(jié)數(shù)目增加明顯。按前面所述方法進行茜素紅染色后，鏡下觀察可見成骨誘導分化組內(nèi)細胞中形成數(shù)量、形態(tài)大小不等、顏色深淺不等的的紅色結節(jié)，成骨誘導空白對照組細胞茜素紅染色后，鏡下觀察未見明顯紅色結節(jié)形成，如下圖所示 。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Role of Hox genes in stem cell differentiation[J]. Anne Seifert,David F Werheid,Silvana M Knapp,Edda Tobiasch.  World Journal of Stem Cells. 2015(03)



本文編號：3046626