小麥是我國重要的糧食作物,在世界各地均有廣泛的種植,但蚜蟲經常給小麥的產量和品質帶來嚴重威脅。利用化學藥物防治是控制蚜蟲危害的常用方法,然而農藥的過度使用會導致嚴重的環(huán)境污染并影響人類的健康。通過轉基因技術培育抗蚜小麥新品種則有望減少化學藥物的使用并提高小麥的產量。本課題以掌葉半夏凝集素基因（PPA）轉化石4185小麥獲得的轉基因后代材料為為研究對象,在探究其PPA基因的存在位置及遺傳方式分析的基礎上,通過進行回交轉育及同質化篩選,獲得具有胞質遺傳且同質化程度高的抗蚜轉基因小麥。本課題的研究工作主要結果如下:通過正反交實驗確定了目的基因PPA在轉基因小麥中的遺傳方式為既存在細胞核遺傳,也存在胞質遺傳的形式;通過回交、測交實驗,以及PCR鑒定,共篩選出27個較為優(yōu)秀的純合轉基因后代材料,即細胞核中沒有PPA基因存在、并且具有胞質遺傳的純合后代。通過對目的基因的PCR鑒定,結果表明:通過多代回交之后,PPA基因依然存在于轉基因小麥中;通過對回交后代的同質化鑒定分析表明,轉基因小麥后代的抗蚜性,由于后代的同質化程度不同所以表現(xiàn)出的抗蚜效果也不盡相同;不同的材料之間、同一個材料的不同株行,以及... 

【文章來源】：河北科技大學河北省

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質粒圖譜pCambia1380+ubi+PPA+GFP（2）轉基因小麥材料在室內實驗和田間實驗中都表現(xiàn)出了良好的抗蚜效果

142.4結果與分析2.4.1正反交F1代的PCR鑒定及結果分析正交是以轉基因材料作為母本，野生型材料為父本進行雜交。以正交F1代基因組DNA作為模板，特異性擴增PPA基因的PCR結果如圖2-1所示。結果顯示，正交后代全部擴出了特異且清晰的目的條帶。證明轉基因小麥中確實存目的基因PPA。但無法判斷其具體遺傳方式是細胞核遺傳還是細胞質遺傳。M：Marker；+：PPA質粒；—：野生型；1-16：正交F1代16個樣本圖2-1正交F1代材料的PCR結果反交是以野生型材料作為母本，轉基因材料為父本進行雜交。以反交F1代基因組DNA作為模板，特異性擴增PPA基因的PCR結果如圖2-2所示。結果顯示，反交各個后代也均擴增出了特異且清晰的目的條帶。這說明轉基因小麥存在細胞核遺傳的遺傳方式。M：Marker；+：PPA質粒；—：野生型；1-19：反交F1代19個樣本圖2-2反交F1代材料的PCR結果至此，正反交的F1后代均能擴增出目的基因，表明目的基因在轉基因小麥中存在細胞核的遺傳方式，但仍然無法證明有無細胞質遺傳的存在。2.4.2正反交F2代PCR鑒定及結果分析

142.4結果與分析2.4.1正反交F1代的PCR鑒定及結果分析正交是以轉基因材料作為母本，野生型材料為父本進行雜交。以正交F1代基因組DNA作為模板，特異性擴增PPA基因的PCR結果如圖2-1所示。結果顯示，正交后代全部擴出了特異且清晰的目的條帶。證明轉基因小麥中確實存目的基因PPA。但無法判斷其具體遺傳方式是細胞核遺傳還是細胞質遺傳。M：Marker；+：PPA質粒；—：野生型；1-16：正交F1代16個樣本圖2-1正交F1代材料的PCR結果反交是以野生型材料作為母本，轉基因材料為父本進行雜交。以反交F1代基因組DNA作為模板，特異性擴增PPA基因的PCR結果如圖2-2所示。結果顯示，反交各個后代也均擴增出了特異且清晰的目的條帶。這說明轉基因小麥存在細胞核遺傳的遺傳方式。M：Marker；+：PPA質粒；—：野生型；1-19：反交F1代19個樣本圖2-2反交F1代材料的PCR結果至此，正反交的F1后代均能擴增出目的基因，表明目的基因在轉基因小麥中存在細胞核的遺傳方式，但仍然無法證明有無細胞質遺傳的存在。2.4.2正反交F2代PCR鑒定及結果分析

【參考文獻】：
期刊論文
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博士論文
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碩士論文
[1]小麥雄性不育突變體HTS-1中TaEPFL1基因的克隆、定位及表達分析[D]. 孫清栩.西華師范大學 2019
[2]小麥轉基因技術優(yōu)化的探索[D]. 談晶晶.揚州大學 2018
[3]小麥主要害蟲發(fā)生規(guī)律與無人機施藥防治效果研究[D]. 商艷蘭.山東農業(yè)大學 2016
[4]基因槍和農桿菌介導MiR396基因對小麥品種的遺傳轉化[D]. 宋琳琳.華中農業(yè)大學 2016
[5]PPA基因改造、載體構建及轉化[D]. 姚彬.河北科技大學 2012



本文編號：3014384