芥子油苷是十字花目植物中由氨基酸衍生來的特殊的代謝產(chǎn)物。在擬南芥（Arabidopsis thaliana）中,起源于色氨酸的吲哚族芥子油苷是植物防御多種病原菌和食草動物所必需的,研究表明這些化合物具有很強(qiáng)的抗菌活性和潛在的信號功能。擬南芥作為模式植物,其芥子油苷的生物合成和降解已經(jīng)研究得非常清晰了。西蘭花（Brassica oleracea var.italica）是十字花科的常見蔬菜,不僅含有全面的營養(yǎng)成分和礦物質(zhì),還含有大量的芥子油苷,但關(guān)于其芥子油苷的代謝途徑基因的研究卻很少。因此對于西蘭花中芥子油苷的相關(guān)研究具有重要意義。CYP83B1是擬南芥吲哚族芥子油苷生物代謝途徑中的重要合成酶,可催化中間產(chǎn)物吲哚-3-乙醛肟（IAOx）生成1-酸式硝基-2-吲哚基-乙烷（1-aci-nitro-2-indolyl-ethane）,并進(jìn)一步合成吲哚族芥子油苷。IAOx不僅是吲哚族芥子油苷合成的中間產(chǎn)物,同時也是合成植物激素生長素的前體。CYP83B1的敲除可導(dǎo)致IAOx的累積,并產(chǎn)生明顯的生長素過量如頂端優(yōu)勢的表型。因此CYP83B1不僅能參與吲哚族芥子油苷的生物合成還會影響植物的生長發(fā)... 

【文章來源】：東北農(nóng)業(yè)大學(xué)黑龍江省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
英文摘要
1 前言
    1.1 芥子油苷概述
    1.2 吲哚族芥子油苷的研究進(jìn)展
        1.2.1 吲哚族芥子油苷生物合成研究進(jìn)展
        1.2.2 吲哚族芥子油苷生物降解研究進(jìn)展
        1.2.3 吲哚族芥子油苷的調(diào)控
    1.3 吲哚族芥子油苷及其降解產(chǎn)物的生物學(xué)功能
        1.3.1 防御作用
        1.3.2 抗癌作用
        1.3.3 參與植物激素生長素的合成
        1.3.4 參與植物抗毒素的合成
    1.4 西蘭花中芥子油苷研究進(jìn)展
    1.5 CYP83B1的研究進(jìn)展
    1.6 本研究的目的意義
    1.7 本研究的研究內(nèi)容與技術(shù)路線
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 植物材料
        2.1.2 菌株與質(zhì)粒
        2.1.3 生化試劑
        2.1.4 培養(yǎng)基
        2.1.5 實(shí)驗(yàn)儀器
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 BoCYP83B1序列信息獲得
        2.2.2 BoCYP83B1的克隆及生物信息學(xué)分析
        2.2.3 35 S::BoCYP83B1植物表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.2.4農(nóng)桿菌介導(dǎo)的擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化35S::BoCYP83B1
        2.2.5 35 S::BoCYP83B1轉(zhuǎn)基因擬南芥的分子生物學(xué)檢測
        2.2.6 35 S::BoCYP83B1轉(zhuǎn)基因擬南芥表型分析
        2.2.7 BoCYP83B1的表達(dá)模式分析
        2.2.8 BoCYP83B1基因?qū)に丶澳婢趁{迫的響應(yīng)
3 結(jié)果與分析
    3.1 BoCYP83B1的克隆
        3.1.1 BoCYP83B1CDS的克隆
        3.1.2 BoCYP83B1mRNA全長的擴(kuò)增
        3.1.3 BoCYP83B1的生物信息學(xué)分析
        3.1.4 BoCYP83B1蛋白的多重比對
        3.1.5 BoCYP83B1蛋白的進(jìn)化分析
    3.2 35 S::BoCYP83B1植物表達(dá)載體的構(gòu)建
    3.3 35 S::BoCYP83B1轉(zhuǎn)基因擬南芥的構(gòu)建
    3.4 35 S::BoCYP83B1轉(zhuǎn)基因擬南芥的分子生物學(xué)檢測
        3.4.1 35 S::BoCYP83B1轉(zhuǎn)基因擬南芥DNA水平鑒定
        3.4.2 35 S::BoCYP83B1轉(zhuǎn)基因擬南芥RNA水平鑒定
    3.5 35 S::BoCYP83B1轉(zhuǎn)基因擬南芥表型分析
        3.5.1 35 S::BoCYP83B1轉(zhuǎn)基因擬南芥形態(tài)學(xué)表型觀察
        3.5.2 35 S::BoCYP83B1轉(zhuǎn)基因擬南芥芥子油苷的檢測
        3.5.3 35 S::BoCYP83B1轉(zhuǎn)基因擬南芥芥子油苷代謝途徑關(guān)鍵基因分析
        3.5.4 35 S::BoCYP83B1轉(zhuǎn)基因擬南芥生長素含量測定
    3.6 BoCYP83B1的組織定位
        3.6.1 BoCYP83B1啟動子的克隆
        3.6.2 BoCYP83B1啟動子元件分析
BoCYP83B1::GUS植物表達(dá)載體的構(gòu)建">        3.6.3 P_BoCYP83B1::GUS植物表達(dá)載體的構(gòu)建
BoCYP83B1::GUS轉(zhuǎn)基因擬南芥的構(gòu)建">        3.6.4 P_BoCYP83B1::GUS轉(zhuǎn)基因擬南芥的構(gòu)建
BoCYP83B1::GUS轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選">        3.6.5 P_BoCYP83B1::GUS轉(zhuǎn)基因擬南芥的篩選
BoCYP83B1::GUS轉(zhuǎn)基因擬南芥的分子生物學(xué)檢測">        3.6.6 P_BoCYP83B1::GUS轉(zhuǎn)基因擬南芥的分子生物學(xué)檢測
        3.6.7 BoCYP83B1的表達(dá)模式分析
    3.7 BoCYP83B1的對激素及逆境脅迫的響應(yīng)
BoCYP83B1::GUS轉(zhuǎn)基因擬南芥中的GUS對激素及逆境脅迫響應(yīng)">        3.7.1 P_BoCYP83B1::GUS轉(zhuǎn)基因擬南芥中的GUS對激素及逆境脅迫響應(yīng)
        3.7.2 西蘭花中BoCYP83B1對激素及逆境脅迫的響應(yīng)
4 討論
    4.1 BoCYP83B1功能的探討
    4.2 BoCYP83B1逆境表達(dá)模式的探討
5 結(jié)論
致謝
參考文獻(xiàn)
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]西蘭花營養(yǎng)價值及深加工研究進(jìn)展[J]. 吳廣輝,畢韜韜.  農(nóng)產(chǎn)品加工. 2015(21)
[2]西蘭花預(yù)防和治療腫瘤研究的新進(jìn)展[J]. 洪姣,王佳蕊,黃春琦,徐殿琴,張婷,許健.  腫瘤藥學(xué). 2014(06)
[3]西蘭花中蘿卜硫素提取、分離與抗癌活性研究[J]. 季宇彬,池文杰,鄒翔,王志舉.  哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2005(03)
[4]植物細(xì)胞色素P450[J]. 余小林,曹家樹,崔輝梅,葉紈芝.  細(xì)胞生物學(xué)雜志. 2004(06)



本文編號：3003389