二酰甘油�；D(zhuǎn)移酶（Diacylglycerol acyltransferase,DGAT）是植物中進(jìn)行三酰甘油（TAG）生物合成反應(yīng)中最后一步的關(guān)鍵酶和限速酶,該酶屬于�；D(zhuǎn)移酶超家族。目前,已從煙草、油菜、大豆、蓖麻等物種中克隆獲得編碼DGAT1蛋白的基因并做了功能分析。續(xù)隨子（Euphorbia lathyris L.）是一種開發(fā)前景廣闊的新型能源油料作物,且其脂肪酸組分與理想的柴油替代品分子構(gòu)成相似,是我國生物燃油發(fā)展的理想原料。而針對續(xù)隨子DGAT1基因和生物學(xué)功能的分析研究尚未見報(bào)道。為探究續(xù)隨子中DGAT1基因?qū)τ谡{(diào)控種子油脂合成的作用機(jī)理,本研究依據(jù)續(xù)隨子轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù),采用RT-PCR技術(shù)分離和鑒定出一個(gè)DGAT1基因（命名為ElDGAT1）,并分析該基因的序列特征及表達(dá)特性,分別構(gòu)建了ElDGAT1基因的酵母和植物表達(dá)載體,通過異源表達(dá)來鑒定ElDGAT1基因的生物學(xué)功能,為全面闡明續(xù)隨子油脂合成和積累的分子機(jī)制及其關(guān)鍵基因的表達(dá)機(jī)制提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù),同時(shí)進(jìn)一步將調(diào)控續(xù)隨子油脂高水平合成的關(guān)鍵基因運(yùn)用基因工程的技術(shù)進(jìn)行生物工程轉(zhuǎn)化應(yīng)用提供依據(jù)。主要研究結(jié)果如下:1.基于續(xù)隨... 

【文章來源】：山西農(nóng)業(yè)大學(xué)山西省

【文章頁數(shù)】：75 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線

102.2.1ElDGAT1基因序列分析借助在線軟件ORFFinder對ElDGAT1基因開放閱讀框分析可知（如圖2-1）：ElDGAT1基因全長為2376bp，編碼區(qū)長1530bp，5’-非編碼區(qū)長472bp，3’-非編碼區(qū)長374bp，共編碼509個(gè)氨基酸。圖2-1ElDGAT1基因全長cDNA序列及翻譯的氨基酸序列Fig.2-1Full-lengthofcDNAandtranslatedaminoacidsequencesofElDGAT1gene注：方框ATG為起始密碼子；TGA為終止密碼子。Note:ATG(Startcodon)andTGA(stopcodon)areshowninbox．2.2.2ElDGAT1蛋白基本理化性質(zhì)分析Expasy數(shù)據(jù)庫在線分析軟件ProtParam預(yù)測ElDGAT1蛋白的理化性質(zhì)，可知：ElDGAT1蛋白化學(xué)分子式為C2675H4121N691O702S31，相對分子質(zhì)量58.19KDa，等電點(diǎn)pI=8.89，氨基酸含量最高的亮氨酸(Leu)為10.4%，含量最低的谷氨酰胺(Gln)為1.8%（見表2-1）。ElDGAT1蛋白不穩(wěn)定系數(shù)51.25，脂溶系數(shù)101.67，親水系數(shù)0.284。研究發(fā)現(xiàn)，不穩(wěn)定系數(shù)小于40的蛋白質(zhì)屬于穩(wěn)定蛋白[58]，親水系數(shù)大于0，則對應(yīng)的蛋白質(zhì)為疏水性蛋白[59]。因此，推測ElDGAT1蛋白為不穩(wěn)定的疏水性膜結(jié)合蛋白。2.2結(jié)果與分析

12圖2-2ElDGAT1蛋白親疏水性預(yù)測Fig.2-2HydrophilicityandhydrophobicitypredictionofElDGAT1protein2.2.3ElDGAT1蛋白跨膜區(qū)、亞細(xì)胞定位、信號(hào)肽及功能結(jié)構(gòu)域預(yù)測圖2-3ElDGAT1蛋白跨膜區(qū)域分析Fig.2-3TransmembraneregionanalysisofDGAT1proteininEuphorbialathyrisTMHMM在線分析ElDGAT1蛋白的跨膜區(qū)，結(jié)果顯示（如圖2-3）：該序列長度為509，這與ORFFinder預(yù)測的結(jié)果相一致。ElDGAT1蛋白形成9個(gè)跨膜螺旋區(qū)，由膜內(nèi)到膜外5個(gè)，膜外到膜內(nèi)4個(gè)，分別在111-130位、154-173位、185-207位、212-234位、301-323位、349-371位、411-433位、443-465位、478-500位氨基酸之間，其跨膜

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
[1]續(xù)隨子三個(gè)候選內(nèi)參基因的克隆及液泡膜Na+/H+逆向轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的表達(dá)分析[D]. 李春霞.南京師范大學(xué) 2013
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本文編號(hào)：3001103