目的構(gòu)建小鼠resistin基因表達(dá)載體,并將其導(dǎo)入小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞中,從而建立能夠高表達(dá)resistin的單核巨噬細(xì)胞系。方法從小鼠脂肪組織提取mRNA,PCR后連接到真核表達(dá)載體進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證,同時(shí)構(gòu)建慢病毒載體,感染至RAW264.7細(xì)胞中,通過(guò)熒光顯微鏡觀(guān)察是否轉(zhuǎn)染成功,ELISA方法檢測(cè)蛋白分泌水平。結(jié)果雙酶切結(jié)果顯示構(gòu)建的質(zhì)粒中有大小為345bp的resistin插入條帶;經(jīng)過(guò)測(cè)序及BLAST比對(duì),插入序列與Genebank中resistin的小鼠CDS序列相同,沒(méi)有移碼突變;熒光顯微鏡觀(guān)察病毒感染后的RAW264.7細(xì)胞,紅色熒光比率達(dá)到70%;ELISA檢測(cè)培養(yǎng)的感染細(xì)胞上清中resistin分泌顯著增加。結(jié)論成功獲得了能夠分泌resistin蛋白的單核/巨噬細(xì)胞。 

【文章來(lái)源】：解剖科學(xué)進(jìn)展. 2020,26(05)

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 動(dòng)物及細(xì)胞
    1.2 主要試劑
    1.3 引物設(shè)計(jì)
    1.4 目的基因resistin的擴(kuò)增
    1.5 重組質(zhì)粒的構(gòu)建和檢驗(yàn)
    1.6 電轉(zhuǎn)
    1.7 病毒重組質(zhì)粒的構(gòu)建和檢驗(yàn)
    1.8 病毒感染
    1.9 Raw264.7細(xì)胞培養(yǎng)上清中Resistin蛋白水平檢測(cè)
    1.1 0 統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果
    2.1 重組質(zhì)粒的檢驗(yàn)
    2.2 重組質(zhì)粒測(cè)序鑒定及電轉(zhuǎn)
    2.3 病毒感染效率檢測(cè)
    2.4 細(xì)胞外分泌resistin的檢測(cè)
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]RNA結(jié)合蛋白MOV10在阿爾茨海默病人腦組織及細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J]. 馬珺,薛一雪,鞏威,朱璐,高麗麗,商秀麗.  解剖科學(xué)進(jìn)展. 2017(06)



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