發(fā)布時間：2021-01-18 06:15

　　目的:原發(fā)性肝癌被預測為2018年全球第六大最常被診斷癌癥和全球第四大癌癥死亡原因,肝細胞肝癌（hepatocellular carcinoma,HCC）被認為是原發(fā)性肝癌的最常見形式。大多數HCC患者表現為晚期,為了開發(fā)HCC患者治療的新策略,對HCC發(fā)生和發(fā)展過程中涉及的分子機制的探究是必要的。血管內皮生長因子A（vascular endothelial growth factor A,VEGFA）是血管生成的關鍵調控因子,抗血管生成療法在肝癌治療中的作用已被公認,對HCC中影響VEGFA表達的分子機制的研究十分必要。泛素特異肽酶22（ubiquitin specific peptidase 22,USP22）是去泛素化酶（de-ubiquitylation enzymes,DUBs）家族的一員,在HCC中,USP22起促癌作用,但具體機制尚不明確。本研究探討了USP22調節(jié)VEGFA轉錄的分子機制及其對HCC細胞生長、腫瘤發(fā)生和血管生成擬態(tài)的影響,為HCC治療及靶點的探索提供新思路。研究方法:1、Western blot法檢測USP22及VEDFA蛋白在HCC組織中表達情況,Pe... 

【文章來源】：中國醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

USP22及VEGFA在HCC組織中高表達且呈正相關A:35對HCC癌組織及對應癌旁組織USP22及VEGFA蛋白表達情況Westernblot條帶；B:USP22及VEGFA蛋白表達情況柱狀圖；C:USP22與VEGFA蛋白表達情況Pearson相關性

沉默USP22減少VEGFA和HIF-1α蛋白表達及VEGFAmRNA表達A：沉默USP22后VEGFA和HIF-1α蛋白表達情況；B：沉默USP22后VEGFA和HIF-1αmRNA表達情況；Cocl2表示氯化鈷，抑制脯氨�；u化酶，模擬缺氧環(huán)境；數據以均數±

中國醫(yī)科大學碩士學位29進一步通過CHX實驗驗證缺氧條件下USP22對HIF-1α蛋白的穩(wěn)定作用，實驗結果顯示，對于siNC組，與未加CHX處理的細胞相比，加入CHX處理0.5h和1h的細胞HIF-1α蛋白表達顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；對于siUSP22組，與未加CHX處理的細胞相比，加入CHX處理0.5h和1h的細胞HIF-1α蛋白表達顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），與加入CHX處理0.5h的細胞相比，加入CHX處理1h的細胞HIF-1α蛋白表達顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）；與siNC組未加CHX處理時的細胞相比，siUSP22組未加CHX處理時的細胞HIF-1α蛋白表達顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且與siNC組HIF-1α蛋白表達隨CHX處理降低的速度相比，siUSP22組HIF-1α蛋白表達隨CHX處理降低的速度較快（圖4）。以上結果進一步證實USP22在缺氧條件下穩(wěn)定HIF-1α蛋白表達，且這一作用不是通過抑制細胞合成實現的，提示我們這一作用可能與抑制蛋白降解有關。圖4缺氧條件下USP22穩(wěn)定HIF-1αA：CHX實驗Westernblot條帶圖；B：HIF-1α蛋白表達柱狀圖；CHX表示放線菌酮，一種蛋白合成抑制劑；Cocl2表示氯化鈷，抑制脯氨�；u化酶，模擬缺氧環(huán)境；數據以均數±標準差表示（n=3），組間比較采用單因素方差分析及Tukey檢驗；*表示P<0.05。3.5缺氧條件下USP22對HIF-1α有去泛素化作用我們想進一步驗證USP22穩(wěn)定HIF-1α是否與USP22的去泛素化作用抑制蛋白降解相關。我們通過泛素化的Co-IP實驗，轉染His-ubiquitin質粒及加入MG132抑制泛素蛋白降解，通過Co-IP實驗驗證USP22對HIF-1α蛋白是否有去泛素化作用。實驗結果顯示，與siNC組相比，siUSP22組HIF-1α蛋白泛素化水平增加，表明缺氧條件下沉默USP22可以促進HIF-1α蛋白泛素化，即缺氧條件下USP22對HIF-

【參考文獻】：
期刊論文
[1]泛素-蛋白酶體系統(tǒng)與精子DNA損傷修復的研究進展[J]. 張國巍,蔡鴻財,商學軍.  中華男科學雜志. 2016(09)



本文編號：2984439