馬鈴薯是最重要的塊莖類糧食作物。栽培馬鈴薯以四倍體為主,但是四倍體遺傳和薯塊繁殖增加了馬鈴薯改良的難度。因此越來(lái)越多的科學(xué)家呼吁在二倍體水平進(jìn)行馬鈴薯的再馴化,將馬鈴薯馴化成種子繁殖作物。但是二倍體馬鈴薯存在著自交不親和的現(xiàn)象,使得一些優(yōu)秀基因不能交流,則是二倍體育種的一個(gè)重大難題。植物基因工程技術(shù)可以通過(guò)直接基因定點(diǎn)突變來(lái)打破自交障礙實(shí)現(xiàn)自交親和,從而為實(shí)現(xiàn)二倍體育種提供原材料。本文對(duì)二倍體馬鈴薯CIP 703541的柱頭進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序,對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行拼接,利用參考基因組DM的S-RNase序列對(duì)拼接結(jié)果進(jìn)行比對(duì),成功擴(kuò)增2條全新的S-RNase序列。并設(shè)計(jì)構(gòu)建附帶有NPT II基因和GFP基因的CRISPR/cas9表達(dá)載體對(duì)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的二倍體馬鈴薯的遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行摸索,對(duì)S-RNase進(jìn)行敲除。其中包括預(yù)培養(yǎng)時(shí)間、再生階段植物激素濃度、愈傷再生的卡那霉素篩選濃度以及抗性芽生根培養(yǎng)的卡那霉素篩選濃度的探究。結(jié)果表明:（1）預(yù)培養(yǎng)時(shí)間以2天最適合侵染。（2）再生階段的植物激素濃度為玉米素:2.0mg·L^-1+萘乙酸0.01 mg·L^-1時(shí)... 

【文章來(lái)源】：云南師范大學(xué)云南省

【文章頁(yè)數(shù)】：55 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

S-likeRNase與S-RNases所組成的進(jìn)化樹

圖 2.2 獲得的 S-RNase 氨基酸序列與 3 條已知全長(zhǎng) S-RNase 氨基酸序列比對(duì)Figure 2.2 alignment of the acquired S-RNase amino acid sequence with 3 known S-RNasesequence

圖 3.1 pKSE402 載體圖Figure 3.1 the pKSE402 vector3.2 方法質(zhì)粒 DNA 提取SE402 質(zhì)粒提取按照 TIANGEN 質(zhì)粒 DNA 提取試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行：加 600 μL 的平衡液 BL 與 CP3 與進(jìn)行潤(rùn)洗，12000 rpm 離心 30 s，倒集管中的平衡液 BL，備用。從平板上挑取大腸桿菌單菌落接種于 5 mL 含 50 mg·L-1Kan 的 LB 液養(yǎng)基的玻璃搖菌管中，37℃、200 rpm 培養(yǎng)過(guò)夜。把過(guò)夜培養(yǎng)的大腸桿菌加入離心管中，12000 rpm 離心 1 min，去掉培

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：2973571