目的克隆珍稀瀕危藥用植物鐵皮石斛轉(zhuǎn)錄因子基因DoWRKY3,并進(jìn)行生物信息學(xué)和表達(dá)模式分析。方法采用RT-PCR和RACE技術(shù)獲取基因全長(zhǎng);利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測(cè)蛋白的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)域和亞細(xì)胞定位等分子特性;用軟件DNASTAR 6.0和MEGA 6.0分別進(jìn)行氨基酸多序列比對(duì)和進(jìn)化關(guān)系分析;借助定量PCR檢測(cè)基因表達(dá)模式。結(jié)果分離到DoWRKY3基因（GenBank注冊(cè)號(hào)KT957549）,cDNA全長(zhǎng)2 065 bp,編碼1條由509個(gè)氨基酸組成的多肽,相對(duì)分子質(zhì)量55 580,等電點(diǎn)6.58;推定的DoWRKY3氨基酸序列具有植物WRKY蛋白家族保守的2個(gè)WRKY結(jié)構(gòu)域（217²79、381⁴49）、2個(gè)WRKYGQK位點(diǎn)和2個(gè)C₂H₂型鋅指結(jié)構(gòu)元件(C-X₄-C-X_22-23-H-X₁-H);該蛋白預(yù)測(cè)無(wú)信號(hào)肽或跨膜域,定位在細(xì)胞核;DoWRKY3蛋白與多種植物WRKY蛋白一致性較高（46.3%⁵7.4%... 

【文章來(lái)源】：中草藥. 2017年14期 北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料
2 方法
    2.1 RNA提取和c DNA合成
    2.2 RACE和q PCR驗(yàn)證
    2.3 序列分析
    2.4 定量PCR分析
3 結(jié)果與分析
    3.1 Do WRKY3基因全長(zhǎng)克隆
    3.2 Do WRKY3基因編碼的蛋白理化特性分析
    3.3 Do WRKY3蛋白結(jié)構(gòu)域、定位和跨膜區(qū)分析
    3.4 Do WRKY3蛋白的三維建模
    3.5 Do WRKY3與植物WRKY蛋白序列比對(duì)分析
    3.6 Do WRKY3基因編碼蛋白的系統(tǒng)進(jìn)化樹分析
    3.7 基因表達(dá)模式分析
4 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]鐵皮石斛轉(zhuǎn)錄因子基因(DoWRKY2)的克隆與表達(dá)分析[J]. 趙俊,孟燦燦,趙亦帆,王晨曦,樊洪泓,金青,李大輝,林毅,蔡永萍.  農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào). 2015(08)
[2]鐵皮石斛轉(zhuǎn)錄因子基因DoWRKY1的克隆與表達(dá)分析[J]. 趙俊,孫時(shí)偉,孟燦燦,金青,樊洪泓,林毅,蔡永萍.  中國(guó)中藥雜志. 2015(14)
[3]鐵皮石斛化學(xué)成分研究[J]. 周佳,周先麗,梁成欽,蘇小建,李伯林,卿亞艷,吳園娥.  中草藥. 2015(09)
[4]鐵皮石斛咖啡酰輔酶A氧甲基轉(zhuǎn)移酶基因的分離與表達(dá)分析[J]. 張崗,胡本祥,張大為,陳偉,郭順星.  中草藥. 2014(08)



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