發(fā)布時間：2020-12-16 23:58

　　油棕的果實含油量極高,占干重質(zhì)量可達90%,被譽為“世界油王”,長鏈脂肪�；� CoA 合成酶（long chain long-chain acyl-CoA synthetase,LACS）將游離的脂肪酸活化,生成脂肪�；鵆oA,進而在高等植物的油脂合成和降解途徑中發(fā)揮重要的功能。在本研究中,我們成功從油棕中克隆到了油棕LACS蛋白家族中的基因EgLACS1和EgLACS9。這些克隆都包含一個高度保守AMP結(jié)合域,一個ACS信號基序和一個特殊的連接區(qū)域。進化樹顯示,EgLACS1與AtLACS1,BnLACS1和AhLACS1屬于同一個分支,主要參與植物的超長鏈脂肪酸（VLCFA）合成蠟和角質(zhì),這也說明EgLACS1可能參與了油脂的合成。EgLACS9和AtLACS9,BnLACS9和GmLACS9等屬于同一個分支,主要參與質(zhì)體到內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的轉(zhuǎn)運。酵母互補實驗證明了EgLACS 和EgLACS9編碼的長鏈脂肪�；o酶A合成酶能夠補償酵母YB525由于缺乏Faa1和Faa4編碼蛋白而失去的功能。淺藍菌素作用的條件下,在培養(yǎng)基中分別添加棕櫚酸（C16:0）、硬脂酸（C18:0）或油酸（C18:1... 

【文章來源】：海南大學海南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖３．１基因表達分析和克隆結(jié)果??Ｆｉｇ?３．１?ｒｅｓｕｌｔｓ?ｏｆ?ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ａｎｄ?ｃｌｏｎｉｎｇ??

Ｖｌｏｘ和ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ和作為對照的含有空載的ＹＢ５２５菌株，并向培養(yǎng)基中??添加２５ｐｍ淺藍菌素抑制劑，和這三種不同的游離脂肪酸，在酵母細胞從０天到??４天的時間里，每隔２４ｈ，測定一次ＯＤ＿。如圖３．３Ｃ－Ｄ，?ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和??ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ的生長速度明顯高于對照組，而ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和ＥｇＬＡＣＳｌ－??Ｖ２ｏｘ蛋白對游離脂肪酸Ｃｌ６，?Ｃｌ８柱和Ｃｌ?８的利用無顯著性差異。??３．１．４?ＥｇＬＡＣＳｌ對長鏈脂肪酸熒光類似物的吸收??為了進一步確定ＥｇＬＡＣＳｌ在酵母中是否和Ｆａｔｌｐ?—起完成脂肪酸的轉(zhuǎn)運，??我們向己經(jīng)被誘導(dǎo)的的酵母中添加５ｐＭ的脂肪酸熒光類似物ＣＶＢＯＤＩＰＹ－Ｃｕ。??反應(yīng)后

Ａ．?ＹＢ５２５?ｈａｒｂｏｒｉｎｇ?ｅｍｐｔｙ?ｖｅｃｔｏｒ?Ｂ．?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ??Ｃ．?Ｔｈｅ?ｒｅｓｕｌｔ?ｏｆ?ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ?Ｄ．?Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ?ｉｎｔｅｎｓｉｔｙ?ｏｆ?ｃｅｌｌｓ??此外也對熒光強度進行了定量測量，如圖３．４?Ｄ，ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和??ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ菌體的熒光強度是ＹＢ５２５空載體的１．８和２倍，ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ??和ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２〇Ｘ兩個過表達株之間沒有顯著性差異。??３．１．５?ＥｇＬＡＣＳｌ脂質(zhì)和脂肪酸含置??為了確定探討ＥｇＬＡＣＳｌ蛋白是否參與脂類和脂肪酸的生物合成，對??ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖｌｏｘ和ＥｇＬＡＣＳｌ－Ｖ２ｏｘ和對照ＹＢ５２５?（ＥＶ）酵母用半乳糖誘導(dǎo)１８－??２０ｈ后，脂質(zhì)含量通過蘇丹黑Ｂ染色法測量。如圖３．５?Ａ，與對照組相比，ＥｇＬＡＣＳ?１?－??Ｖ１?ｏｘ和ＥｇＬＡＣＳ?１?－Ｖ２ｏｘ脂質(zhì)含量的增加。??２２??


本文編號：2921025