目的通過(guò)構(gòu)建TGIF（TG-interacting factor,TGIF）穩(wěn)定低表達(dá)的非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株（A549）,觀察沉默TGIF對(duì)A549細(xì)胞周期分布及Wnt/β-Catenin信號(hào)通路的影響,探討TGIF調(diào)控細(xì)胞周期的分子機(jī)制及對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞致瘤性的影響,為肺癌的治療提供新的作用靶點(diǎn)。方法1.采用靶向TGIF的慢病毒顆粒和無(wú)效干擾對(duì)照慢病毒顆粒分別感染A549細(xì)胞,構(gòu)建TGIF穩(wěn)定低表達(dá)的細(xì)胞株（A549-shTGIF）和無(wú)效干擾對(duì)照細(xì)胞株（A549-shcon）,通過(guò)蛋白免疫印跡（Western blots）檢測(cè)TGIF蛋白表達(dá)水平,鑒定TGIF穩(wěn)定低表達(dá)的A549細(xì)胞株是否構(gòu)建成功。2.利用CASY細(xì)胞計(jì)數(shù)分析儀分析接種細(xì)胞24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)后,A549-shTGIF和A549-shcon細(xì)胞增殖的差異。3.通過(guò)體外軟瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)裸鼠致瘤實(shí)驗(yàn),分析TGIF穩(wěn)定低表達(dá)細(xì)胞與無(wú)效干擾對(duì)照細(xì)胞致瘤性的差異。4.利用流式細(xì)胞儀分析TGIF穩(wěn)定低表達(dá)組與無(wú)效干擾對(duì)照組細(xì)胞周期分布的差異。5.運(yùn)用Western blots分析沉默TGIF對(duì)A549細(xì)... 

【文章來(lái)源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：63 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

技術(shù)路線圖

tern blots 檢測(cè) shRNA 對(duì)靶基因的沉默效率測(cè)靶向 TGIF 的慢病毒顆粒和無(wú)效對(duì)照慢病毒顆粒感染的基因沉默效率，我們用 Western blots 分別檢測(cè)兩組慢病毒胞中 TGIF 蛋白的表達(dá)水平。如圖 3.1 所示，我們用β-Ac白上樣量的評(píng)估，在β-Actin 蛋白表達(dá)量一致的情況下，IF 蛋白表達(dá)水平要遠(yuǎn)低于 A549-shcon 細(xì)胞。這說(shuō)明 TGIF肺癌細(xì)胞 A549 細(xì)胞株構(gòu)建成功。

圖 3.2 沉默 TGIF 基因?qū)?A549 細(xì)胞增殖能力的影響9-shcon 細(xì)胞數(shù)相比，同一時(shí)點(diǎn)的 A549-shTGIF 細(xì)胞數(shù)顯著降TGIF 基因?qū)?A549 細(xì)胞體外克隆形成能力的影隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與 A549-shcon 細(xì)胞(58.4±4.049-shTGIF 細(xì)胞的克隆形成數(shù)量(37.3±2.6)明顯降低(圖(P<0.05)。結(jié)果提示，沉默 TGIF 基因可以降低 A54克隆的能力。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]TGIF,MMP9和蛋VEGF白在胃癌中的表達(dá)及臨床病理聯(lián)系[J]. 胡忠良,文繼舫,沈明,劉英.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2006(01)
[2]TGIF對(duì)胃癌細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的影響[J]. 胡忠良,文繼舫,肖德勝,鄭暉,傅春燕.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2005(09)
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