本文關(guān)鍵詞：褐飛虱亞鐵血紅素過氧化物酶基因N125323生物學功能解析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：亞鐵血紅素過氧化物酶在昆蟲生長發(fā)育、繁殖與先天性免疫等方面發(fā)揮著重要作用。褐飛虱(Nilaparvata lugens (Stal))屬半翅目飛虱科(Hemiptera: Delphacidae),是水稻重要害蟲,為保證水稻產(chǎn)量和質(zhì)量,褐飛虱防治一直是人們刻不容緩的工作。本文以褐飛虱的兩個實驗室種群,飼養(yǎng)在含有Bph1抗性基因Mudgo品種上的種群和飼養(yǎng)在不含抗性基因的感蟲品種TN1上的種群為實驗對象,通過研究褐飛虱亞鐵血紅素過氧化物酶基因Nl25323在褐飛虱存活、取食、產(chǎn)卵、免疫等方面的作用,初步明確該基因的生物學功能,主要結(jié)果如下：克隆了褐飛虱亞鐵血紅素過氧化物酶基因Nl25323,該基因全長1747bp,開放閱讀框(ORF)1560bp,編碼519個氨基酸；預測該基因編碼蛋白分子量為58.9KDa,等電點為5.61,無分泌信號肽和跨膜區(qū),兩個LRE整合素結(jié)合位點,具有亞鐵血紅素結(jié)合位點和Ca2+結(jié)合位點。表達譜分析表明,該基因在褐飛虱頭部、五齡若蟲及初羽化成蟲體內(nèi)表達量較高,大腸桿菌侵染Mudgo種群褐飛虱后,Nl25323表達量變化不顯著。兩個種群的比較分析表明,Mudgo種群褐飛虱在頭部和唾液腺的表達量顯著高于TN1種群。沉默Nl25323導致褐飛虱若蟲存活率下降,并且在抗性水稻品種Mudgo上的存活率顯著低于在感蟲水稻品種TN1上。同時,沉默Nl25323還導致Mudgo種群褐飛虱蜜露分泌量及產(chǎn)卵量顯著降低,但不影響褐飛虱體內(nèi)的H2O2含量。以上結(jié)果表明,Nl25323在褐飛虱生長發(fā)育、存活與繁殖中發(fā)揮著重要作用,并且可能與褐飛虱兩種群間的致害性變異有關(guān),但Nl25323發(fā)揮的這些作用與清除褐飛虱體內(nèi)的H2O2無關(guān),Nl25323影響褐飛虱生長發(fā)育繁殖的機理還有待進一步深入研究。
【關(guān)鍵詞】：褐飛虱 亞鐵血紅素過氧化物酶 基因沉默 致害性 水稻
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：S435.112.3
【目錄】：

• 致謝6-8
• 摘要8-9
• Abstract9-14
• 1. 文獻綜述14-21
• 1.1 亞鐵血紅素過氧化物酶14-20
• 1.1.1 亞鐵血紅素過氧化物酶的催化反應機理14-15
• 1.1.2 昆蟲亞鐵血紅素過氧化物酶家族及功能15-20
• 1.2 本研究的目的和意義20-21
• 2. 試驗材料和方法21-30
• 2.1 供試水稻21
• 2.2 供試昆蟲21
• 2.3 褐飛虱基因Nl25323的克隆和序列分析21-23
• 2.3.1 Nl25323 CDS序列的獲取21
• 2.3.2 褐飛虱TN1種群、Mudgo種群樣品的收集21
• 2.3.3 總RNA提取21-22
• 2.3.4 總RNA檢測22
• 2.3.5 cDNA第一鏈的合成22
• 2.3.6 Nl25323的克隆22-23
• 2.3.7 Nl25323的序列分析23
• 2.4 Nl25323表達譜分析23-25
• 2.4.1 各組織和各發(fā)育階段表達譜23-25
• 2.4.2 誘導表達譜25
• 2.5 Nl25323及綠色熒光蛋白GFP的dsRNA合成25-27
• 2.5.1 GFP的克隆25-26
• 2.5.2 PCR擴增帶T7啟動子的DNA模板26-27
• 2.5.3 dsRNA的合成27
• 2.5.4 dsRNA的純化27
• 2.6 褐飛虱注射dsRNA及沉默效果檢測27-28
• 2.6.1 dsRNA的注射27
• 2.6.2 Nl25323沉默效果檢測27-28
• 2.7 生物測定28-29
• 2.7.1 褐飛虱若蟲存活率28
• 2.7.2 褐飛虱雌成蟲蜜露分泌量28
• 2.7.3 褐飛虱雌成蟲產(chǎn)卵量28-29
• 2.8 褐飛虱體內(nèi)過氧化氫含量測定29
• 2.9 數(shù)據(jù)分析29-30
• 3. 結(jié)果與分析30-45
• 3.1 褐飛虱基因Nl25323克隆及其序列分析30-31
• 3.2 褐飛虱基因Nl25323同源性分析31-34
• 3.3 Nl25323表達模式分析34-38
• 3.3.1 各組織和各發(fā)育階段表達模式分析34-37
• 3.3.2 誘導表達分析37-38
• 3.4 注射dsRNA對褐飛虱Nl25323 mRNA水平的影響38-39
• 3.5 沉默Nl25323對兩種褐飛虱種群存活率的影響39-41
• 3.6 沉默Nl25323對兩種褐飛虱種群蜜露分泌量的影響41-43
• 3.7 沉默Nl25323對兩種褐飛虱種群產(chǎn)卵量的影響43-44
• 3.8 沉默Nl25323對褐飛虱體內(nèi)過氧化氫含量的影響44-45
• 4. 討論與總結(jié)45-48
• 4.1 討論45-47
• 4.1.1 Nl25323的時空表達45
• 4.1.2 Nl25323 在褐飛虱免疫中的作用45-46
• 4.1.3 Nl25323在褐飛虱生長發(fā)育、繁殖以及致害性變異中的作用46-47
• 4.2 創(chuàng)新之處47
• 4.3 下一步研究47-48
• 參考文獻48-51

【相似文獻】

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 見煜坤;褐飛虱亞鐵血紅素過氧化物酶基因N125323生物學功能解析[D];浙江大學;2016年

  本文關(guān)鍵詞：褐飛虱亞鐵血紅素過氧化物酶基因N125323生物學功能解析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

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本文編號：287501