發(fā)布時間：2020-10-23 17:21

　　 出芽短梗霉是一類具有典型細胞多形性腐生真菌,它們的生長周期中包括酵母狀細胞、芽孢子、膨大細胞、菌絲狀細胞和厚垣孢子等多種形態(tài)。在不同的生長形態(tài)下,出芽短梗霉可以合成代謝出不同的代謝產(chǎn)物。普魯蘭糖是出芽短梗霉合成的細胞外線性多糖。普魯蘭糖具有極佳的成膜性、成纖維性、阻氧性、可塑性、粘結(jié)性及易自然降解等獨特的理化和生物學(xué)特性,無毒無害,對人體無任何副作用,因此它在生物醫(yī)藥,食品等方面具有廣泛的應(yīng)用。普魯蘭糖的生物合成過程至今還沒有完全清楚。為研究不同形態(tài)下出芽短梗霉的特性,以及普魯蘭糖的生物合成機理。本試驗通過密度梯度離心,分離出不同形態(tài)的出芽短梗霉細胞。并且對不同培養(yǎng)條件下產(chǎn)糖有顯著差異的出芽短梗霉細胞進行轉(zhuǎn)錄組從頭組裝測序,分析差異表達基因,發(fā)掘普魯蘭糖的合成相關(guān)基因。本試驗得到了下列結(jié)論。(1)在60%的percoll細胞分離液中,成功分離出芽短梗霉的酵母狀細胞和膨大細胞。電子顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)膨大細胞內(nèi)有明顯的糖分積累。(2)通過Illumina Hi Seq 2000轉(zhuǎn)錄組從頭測序,我們得到了25,134,395對雙末端測序讀數(shù)。其中,有23843614對過濾后的讀數(shù),它們的GC含量為53.29%。我們通過序列組裝得到了13,705個unigenes,總共長度為19,965,178bp。這些unigenes的長度范圍從201到15116 bp,平均長度為1457 bp,N50為2221 bp。其中54.38%的unigenes長度大于500 bp。(3)通過對YPD(產(chǎn)糖)和YND(不產(chǎn)糖)兩種不同培養(yǎng)條件下的出芽短梗霉進行轉(zhuǎn)錄組測序,發(fā)現(xiàn)有5649個基因具有顯著差異表達,其中有2618個基因在YPD中高表達,有3031個基因在YND中高表達。對這些差異基因進行KEGG注釋,發(fā)現(xiàn)它們被注釋到了137個代謝通路中,其中關(guān)于普魯蘭糖合成的候選基因有15個。在沒有基因組信息的情況下,轉(zhuǎn)錄組從頭測序為我們提供了一個相對合理的基因信息來了解出芽短梗霉的整個基因組序列。它為我們發(fā)現(xiàn)新的基因,分子標記和組織特異性表達的基因提供了很好的平臺。為我們今后的分子生物學(xué)實驗提供了更多有意義的參考。
【學(xué)位單位】：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：Q933
【部分圖文】：

1988)。胞形態(tài)轉(zhuǎn)變過程復(fù)雜，影響條件眾多。對出芽短梗霉細胞分化的研現(xiàn)象觀察。我們很難通過分子手段來研究出芽短梗霉細胞的分化特機制，我們的認識還有很大的局限性。出芽短梗霉培養(yǎng)快速，各個是研究細胞分化機理潛在的生物學(xué)模型，具有重要研究價值。糖研究概述糖是由酵母狀真菌合成的重要的微生物胞外多糖。它是一種水溶性基馬來酰亞胺和二甲基亞砜，普魯蘭糖不溶于有機溶劑（Leathers，要由麥芽三糖單元通過 α（1-6）糖苷鍵連接而成。麥芽三糖之間生1-4）糖苷鍵連接而成（圖 1-2）。普魯蘭糖具有優(yōu)異的理化性質(zhì)，種工業(yè)，包括食品，農(nóng)業(yè)，紡織品，化妝品和藥品。受發(fā)酵條件的子量一般在 4×104到 6×105Da 之間(Lee and Yoo，1993)。平均分普魯蘭糖的的生物活性至關(guān)重要，這包括化學(xué)釋放能力和免疫調(diào)節(jié)活。

沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文物合成或者參與合成普魯蘭糖的前體物質(zhì)。只是，我們還由研究表明，在含有麥芽糖培養(yǎng)條件下通過糖基的轉(zhuǎn)移反和異麥芽糖（Hayashi et al，1994）。88)指出出芽短梗霉并不是直接轉(zhuǎn)移葡糖糖基團到普魯蘭糖累普魯蘭糖合成的前體物質(zhì)，然后當細胞需要合成普魯蘭魯蘭糖。后來有研究發(fā)現(xiàn)，普魯蘭糖的生物合成與細胞內(nèi)imon et al，1998）。這一結(jié)果證實了 LeDuy 的猜想。an 研究發(fā)現(xiàn)，當普魯蘭糖被合成時出芽短梗霉細胞中的 U因為 UDPG 的大量消耗。同時細胞中的 α-磷酸變位酶，酶的活性都很高。根據(jù)自身的研究結(jié)果，以及結(jié)合前人的的可能合成路徑。首先，UDPG 介導(dǎo)的葡萄糖殘基附著在。然后 UDPG 繼續(xù)轉(zhuǎn)移葡萄糖殘基到磷脂分子上形成脂質(zhì)，異麥芽糖與脂質(zhì)相連的葡萄糖基反應(yīng)形成潘糖殘基。最接到普魯蘭糖鏈上。推測的普魯蘭糖合成路徑可見圖 1-3

圖 2-1 不同濃度下兩種形態(tài)出芽短梗霉細胞分離效果g.2-1 Different concentrations of the two forms of aureobasidous cell isolation e芽短梗霉細胞的電鏡研究材料樣品來自 YPD 培養(yǎng)基培養(yǎng)三天經(jīng)過密度梯度離心分離得到的酵母步驟取材：收集的不同形態(tài)的細胞于 1.5ml 的 ep 管中。固定：磷酸緩沖液配置的 2.5%戊二醛固定 2 小時或更長時間。 0.1M 磷酸漂洗液漂洗三次每次 15min。 1%的鋨酸進行固定 2-3 個小時。
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

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本文編號：2853320