目的:1.分析環(huán)境因素與廣州市中小學(xué)生肥胖的關(guān)聯(lián)性;2.探討MC4R基因多態(tài)性與廣州市中小學(xué)生肥胖的關(guān)聯(lián)性;3.評價MC4R基因-環(huán)境交互作用對廣州市中小學(xué)生肥胖的影響。方法:本研究采用頻數(shù)匹配的病例-對照研究方法,通過文獻(xiàn)查閱和生物信息學(xué)方法篩選出MC4R的候選基因多態(tài)性,采用Taqman熒光定量PCR技術(shù)進(jìn)行基因型檢測;應(yīng)用多因素logistic回歸模型分析MC4R基因多態(tài)性與廣州市中小學(xué)生肥胖的關(guān)聯(lián)性,并應(yīng)用遺傳風(fēng)險評分法進(jìn)一步分析基因多態(tài)性對中小學(xué)生肥胖的影響;基于logistic回歸模型分別應(yīng)用相乘交互項和Bootstrapping自助重抽樣法分析基因-環(huán)境的相乘、相加交互作用;采用logistic回歸模型分析評價基因多態(tài)性與食欲的關(guān)聯(lián)性。結(jié)果:1.本次研究共納入877例肥胖學(xué)生和950例BMI正常學(xué)生。多因素logistic回歸分析顯示:食欲、進(jìn)餐時間及上學(xué)日視屏?xí)r間均與中小學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險存在統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)(P0.05)。食欲好和上學(xué)日視屏?xí)r間長可能是中小學(xué)生肥胖的危險因素(OR=2.01,95%CI=1.66-2.43;OR=1.29,95%CI=1.01-1.65);而進(jìn)餐時間一般/長能夠降低學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險(OR=0.68,95%CI=0.50-0.92)。2.MC4R rs12970134和rs17782313多態(tài)性均與中小學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險存在統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)(P0.05)。多因素logistic回歸模型顯示:與GG基因型相比,攜帶rs12970134 GA+AA基因型的學(xué)生發(fā)生肥胖的風(fēng)險增加(OR=1.27,95%CI=1.03-1.56);在加性模型下,每增加一個rs12970134 A等位基因的攜帶,學(xué)生發(fā)生肥胖的風(fēng)險會增加(OR=1.24,95%CI=1.04-1.48)。與TT基因型相比,攜帶rs17782313TC基因型的學(xué)生發(fā)生肥胖的風(fēng)險增加(OR=1.41,95%CI=1.14-1.75),而攜帶rs17782313 TC+CC基因型的學(xué)生發(fā)生肥胖風(fēng)險也會增加(OR=1.39,95%CI=1.14-1.71);在加性模型下,每增加一個rs17782313 C等位基因的攜帶,學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險會增加(OR=1.29,95%CI=1.08-1.54)。本研究未觀察到rs8087522與中小學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險的統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)(P0.05)。構(gòu)建rs17782313和rs12970134的單體型,結(jié)果表明CA、TA+CG單體型與中小學(xué)生肥胖風(fēng)險增加有關(guān)(OR=1.25,95%CI=1.04-1.51;OR=1.61,95%CI=1.12-2.31)。構(gòu)建rs17782313和rs12970134的遺傳風(fēng)險評分,結(jié)果顯示與未攜帶風(fēng)險等位基因相比,攜帶≥1個風(fēng)險等位基因的學(xué)生發(fā)生肥胖的風(fēng)險會增加(OR=1.38,95%CI=1.13-1.69)。rs12970134和rs17782313多態(tài)性與食欲均不存在統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)(P0.05)。3.顯性模型下rs12970134、rs17782313與食欲、進(jìn)餐時間、上學(xué)日視屏?xí)r間之間均無統(tǒng)計學(xué)意義的基因-環(huán)境交互作用(P_(mult)0.05,P_(add)0.05)。遺傳風(fēng)險評分與食欲、進(jìn)餐時間之間無統(tǒng)計學(xué)意義的基因-環(huán)境交互作用;遺傳風(fēng)險評分與上學(xué)日視屏?xí)r間之間存在相乘交互作用(P_(mult)0.05),但不存在統(tǒng)計學(xué)意義的相加交互作用。結(jié)論:(1)食欲、進(jìn)餐時間及上學(xué)日視屏?xí)r間均可能是廣州市中小學(xué)生肥胖發(fā)病風(fēng)險的影響因素;(2)MC4R基因rs12970134和rs17782313多態(tài)性影響廣州市中小學(xué)生肥胖的發(fā)病風(fēng)險;(3)以rs12970134和rs17782313構(gòu)建的遺傳風(fēng)險評分與上學(xué)日視屏?xí)r間之間存在統(tǒng)計學(xué)意義的相乘交互作用。
【學(xué)位單位】：廣東藥科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2018
【中圖分類】：R723.14
【部分圖文】：

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文Polymerase Chain Reaction, QRT PCR）技術(shù)，其基本原理為（如圖 2.1 所示）：TaqMan 探針是一段寡核苷酸序列，該序列完整時，分別位于 5’和 3’端的熒光報告基團(tuán)（Report group）R 和熒光淬滅基團(tuán)（Quencher group）Q 將會發(fā)生反應(yīng)，淬滅基團(tuán) Q 將會吸收報告基團(tuán) R 發(fā)出的熒光，從而配備的儀器無法檢測識別出熒光信號；當(dāng)進(jìn)行 PCR 擴增時，Taq 酶就會發(fā)揮其 5’-3’核酸外切酶的活性將探針?biāo)饧羟校藭r兩個作用基團(tuán)就會分開，熒光檢測設(shè)備就可以檢測到 R 所發(fā)出的熒光信號，而 R 有兩種類型，一類是 VIC 報告基團(tuán)（標(biāo)記突變等位基因），另一類是 FAM 基團(tuán)（標(biāo)記野生等位基因）。利用 PCR 產(chǎn)物與累積熒光信號呈正比的關(guān)系，從而實現(xiàn)定量分析 PCR 產(chǎn)物的目的。而通過儀器和相應(yīng)分析軟件識別的不同熒光信號來判斷個體所屬基因型。

廣東藥科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文（3） 分型實驗的質(zhì)量控制對 SNPs 進(jìn)行基因分型時，在每個 384 孔板中均隨機設(shè)置 2 個重復(fù)樣本和 2個空白對照，以驗證分型結(jié)果的可靠性，重復(fù)樣本分型一致率應(yīng)達(dá)到 100%。對于分型結(jié)果不明顯的樣本需再次重復(fù)實驗，若結(jié)果仍不明顯則將其剔除。Taqman探針需特別注意避光、冷藏保存，盡量避免因探針問題而影響基因分型的效果。（4） 分型結(jié)果的解讀首先通過 7900HT 型實時熒光定量 PCR 儀來檢測不同的熒光信號，然后采用 SDS 2.4 圖像分析軟件來對不同的熒光信號進(jìn)行分析解讀，對位點等位基因?qū)崿F(xiàn)自動分型，可以得到如下的等位基因分型散點圖（圖 2.2）。由圖可以確定研究樣本的基因型（野生純合子、雜合子以及突變純合子）。

圖 3.1 MC4R 基因各位點的連鎖不平衡程度 D'值（左側(cè)）和 r2值（右側(cè)）應(yīng)用 PHASE 2.1 軟件構(gòu)建 MC4R 的 rs17782313 和 rs12970134 兩位點的單體型。共有 TG、TA、CG、CA 四種單體型，它們在人群中的頻率分別為 80.51%、1.51%、2.36%和 15.62%。其中 TG 單體型的人群頻率最高。在后續(xù)單體型與肥胖的關(guān)聯(lián)分析中，由于 TA 和 CG 單體型頻率均低于 3%，因此都劃分為其他類進(jìn)行分析。單體型與中小學(xué)生肥胖風(fēng)險的關(guān)聯(lián)分析結(jié)果表明：以 TG 為參照單體型，CA單體型與中小學(xué)生肥胖風(fēng)險增加有統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)（OR=1.26，95% CI=1.06-1.51，P=0.011）；而其他類（TA+CG）單體型也與中小學(xué)生肥胖發(fā)生風(fēng)險增加有統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)（OR=1.65，95% CI=1.17-2.33，P=0.005）。經(jīng)協(xié)變量年級、性別、食欲、進(jìn)餐時間及上學(xué)日視屏?xí)r間調(diào)整后，CA、其他類（TA+CG）單體型仍與中小學(xué)生肥胖高風(fēng)險性之間存在統(tǒng)計學(xué)關(guān)聯(lián)（OR=1.25，95% CI=1.04-1.51，P=0.019；OR=1.61，95% CI=1.12-2.31，P=0.010）。詳見表 3.7。表3.7 MC4R 基因 2 個位點的單體型與中小學(xué)生肥胖風(fēng)險的關(guān)聯(lián)分析
【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2841457