【摘要】：烏頭屬(Aconitum L.)植物是我國重要的傳統(tǒng)中藥材,應(yīng)用歷史悠久,具有顯著的強心、鎮(zhèn)痛、抗炎等藥理作用,但因其具有劇毒特性而應(yīng)用受到極大限制。通過炮制等方法可減輕烏頭毒性,但不能徹底解決烏頭毒性。長久以來,民間存在利用烏頭屬植物食療治療疾病傳統(tǒng),中毒事件在我國各地頻繁發(fā)生。本研究通過對近年烏頭屬植物中毒事件文獻分析,共統(tǒng)計中毒案例5593例,中毒事件主要發(fā)生于云南(38.62%)及四川(10.37%)等地,中毒原因主要為飲用酒劑(20.17%)及治病或食療(13.82%)。因此,探究減毒存效和保證烏頭屬植物用藥安全、有效、可控是亟待解決的問題。烏頭二萜生物堿是烏頭發(fā)揮藥理作用的重要基礎(chǔ)物質(zhì),其骨架上C_8位乙酰酯和C_(14)位苯甲酰酯與烏頭的劇毒性緊密相關(guān),而BAHD�；D(zhuǎn)移酶是催化酯基合成的關(guān)鍵終端酶,因此找到烏頭中催化烏頭生物堿骨架上酯基形成的主要BAHD基因,是解決烏頭毒性問題的關(guān)鍵。本研究以烏頭屬代表植物——烏頭(Aconitum carmichaelii)的BAHD候選基因為實驗材料,通過原核表達、體外酶活分析等對烏頭候選BAHD基因進行功能鑒定,主要研究結(jié)果為:從烏頭BAHD�；D(zhuǎn)移酶候選基因中篩選得關(guān)鍵候選基因6個,構(gòu)建得關(guān)鍵候選基因原核表達菌5個,通過異源表達成功誘導(dǎo)出5個關(guān)鍵候選基因的蛋白,優(yōu)化獲得最佳表達條件28℃、4 h、0.5 mM IPTG,以優(yōu)化表達條件誘導(dǎo)乙酰酯候選基因AcBAHD6、AcBAHD17及苯甲酰酯候選基因AcBAHD21獲得蛋白,以�；w乙酰輔酶A和苯甲酰輔酶A、酰基受體苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿和烏頭原堿為底物,進行酶促反應(yīng),但均未檢測到預(yù)期產(chǎn)物。本研究構(gòu)建得異源表達菌及誘導(dǎo)出烏頭關(guān)鍵BAHD候選基因異源蛋白,為鑒定其它候選基因及找到烏頭劇毒特性關(guān)鍵BAHD基因奠定基礎(chǔ),以期為解決烏頭劇毒性及創(chuàng)造烏頭低毒高效新種質(zhì)資源具有重要意義。
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S567;R595
【圖文】：

烏頭炮制減毒水解機制

BAHD�；D(zhuǎn)移酶催化機制Fig.1-2CatalyticmechanismofBAHDacyltransferase

烏頭二萜生物堿酯基形成預(yù)測圖

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 王璞;王嘉倫;王亞旭;王聿成;;藏藥處方使用訶子烏頭配伍的概況及減毒機理分析[J];世界中醫(yī)藥;2015年02期

2 陳芙蓉;鄒大江;閃仁龍;許直來;馬蘭花;梅之南;黃先菊;;近10年含烏頭堿類植物中毒原因及解毒辦法文獻分析[J];時珍國醫(yī)國藥;2012年12期

3 任媛媛;王鵬;詹妮;田旭;明磊;李平亞;;二萜生物堿生物活性和毒性的研究概況[J];中國實驗方劑學(xué)雜志;2010年11期

4 余蔥蔥;彭成;郭力;代敏;;2000例烏頭類生物堿中毒臨床藥學(xué)原因分析[J];綿陽師范學(xué)院學(xué)報;2009年08期

5 李治瀅;楊麗源;李紹蘭;陳有為;吳少華;;滇南黃草烏內(nèi)生真菌抗菌活性的篩選[J];時珍國醫(yī)國藥;2009年05期

6 肖培根;王鋒鵬;高峰;閆路平;陳東林;劉勇;;中國烏頭屬植物藥用親緣學(xué)研究[J];植物分類學(xué)報;2006年01期

7 朱敏,肖培根;常用藏藥榜嘎的研究[J];中藥材;1989年10期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前2條

1 高彥強;水稻BAHD�；D(zhuǎn)移酶的功能鑒定[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

2 烏力吉特古斯;草烏的民族醫(yī)藥學(xué)及草烏葉藥理實驗和化學(xué)成分研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 張晶;生附子化學(xué)成分及其質(zhì)量控制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2014年

2 陳東安;附子酯型生物堿含量測定及煎煮動態(tài)變化規(guī)律研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2011年

本文編號：2782983