【摘要】：放線菌作為一類珍貴的物種資源,已經(jīng)在生物醫(yī)藥領(lǐng)域表現(xiàn)出了非凡的應(yīng)用前景,目前市場上已知的抗生素類化合物,由放線菌次級代謝產(chǎn)生的占60%。由于普通環(huán)境放線菌資源被不斷挖掘,所獲得的天然產(chǎn)物重復(fù)性急劇增加,天然產(chǎn)物學(xué)者將目標(biāo)轉(zhuǎn)向了極端環(huán)境放線菌資源。高鹽環(huán)境作為一種極端環(huán)境,其中的放線菌資源被不斷的挖掘,其價值也在不斷的被體現(xiàn)。鐵離子作為一種微生物生長繁殖所必需的資源,在生態(tài)環(huán)境中占據(jù)著無可替代的地位。在環(huán)境中,所能螯合鐵離子的鐵載體類化合物被認(rèn)為是微生物爭奪資源的有力武器。同時,此類化合物在生物醫(yī)藥和環(huán)境修復(fù)等領(lǐng)域表現(xiàn)出了巨大的應(yīng)用前景。在本研究的前期工作中發(fā)現(xiàn),與普通環(huán)境(50%左右)相比,嗜鹽放線菌具有產(chǎn)鐵載體能力的菌株數(shù)量多(90%),且鐵載體的螯合能力相對較高。這些實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)恰恰說明了在高鹽環(huán)境中,嗜鹽放線菌的生態(tài)地位較為特殊,具有很好的研究空間。本研究首先進(jìn)行了嗜鹽放線菌分離方法的探究和改良,通過向分離培養(yǎng)基加入不同的培養(yǎng)基底物、不同于以往的氮元素以及加入鐵載體螯合劑來分別研究同一區(qū)域內(nèi),不同土樣的分菌效果,通過3種改良分離方法,共從新疆七角井鹽湖及其附近土樣中分離得到315株嗜鹽放線菌。此外,本課題組在前期的工作中,對大量的嗜鹽放線菌進(jìn)行了多種功能基因的研究,本實(shí)驗(yàn)從中挑選了134株具有多種功能基因的嗜鹽放線菌并入本次所分離到的菌株中。對這449株嗜鹽放線菌進(jìn)行了產(chǎn)鐵載體類化合物能力和其所產(chǎn)鐵載體類化合物螯合能力的檢測。通過前期的預(yù)實(shí)驗(yàn),綜合對比雙層平板法、發(fā)酵產(chǎn)物法,我們發(fā)現(xiàn)對于嗜鹽放線菌而言,倒置法檢測是否能產(chǎn)生鐵載體類化合物,是最便捷且最高效的篩選鐵載體活性菌株實(shí)驗(yàn)手段。通過對鐵載體活性檢測發(fā)現(xiàn),本次分得的315株嗜鹽放線菌中具有產(chǎn)鐵載體能力的菌株占總菌數(shù)的90%左右,而已完成多種類型功能基因高通量篩選的134株嗜鹽放線菌菌株則占97%�？紤]到完成多種類型功能基因高通量篩選的菌株更具有研究的價值和意義,因此在對陽性菌株的復(fù)篩過程中,僅對具有多種類型功能基因的陽性菌株進(jìn)行了復(fù)篩,復(fù)篩結(jié)果顯示,40株嗜鹽放線菌的代謝產(chǎn)物表現(xiàn)出較高的鐵離子螯合能力。其次,對于復(fù)篩結(jié)果中鐵載體活性表現(xiàn)良好的3株潛在嗜鹽放線菌新物種進(jìn)行了多相分類學(xué)鑒定。經(jīng)鑒定,其中菌株YIM 96934和YIM 96448為Phytoactinopolyspora屬新物種,YIM 96095為一潛在新科。最后,從40株復(fù)篩中表現(xiàn)較好的嗜鹽放線菌中,挑選了8株優(yōu)勢菌株,對其進(jìn)行了基因組測序并對基因組對比分析。
【學(xué)位授予單位】：云南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：Q93
【圖文】：

本研究流程圖

CAS法平板檢測嗜鹽放線菌代謝產(chǎn)物初篩實(shí)驗(yàn)Fig2.1DetectionofMetabolitesfromHalophilicActinomycetesbyCASMethod

CAS法平板檢測嗜鹽放線菌代謝產(chǎn)物復(fù)篩實(shí)驗(yàn)Fig2.2DetectionofmetaboliterescreeningofhalophilicActinomycetesbyCASmethod

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 田守征;劉凱;徐麗華;唐蜀昆;趙立興;;嗜鹽放線菌資源及次生代謝產(chǎn)物研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)通報;2014年09期

2 李文均;職曉陽;唐蜀昆;;我國放線菌系統(tǒng)學(xué)研究歷史、現(xiàn)狀及未來發(fā)展趨勢[J];微生物學(xué)通報;2013年10期

3 黃婷婷;林雙君;鄧子新;;放線菌中鐵載體生物合成機(jī)制研究進(jìn)展[J];微生物學(xué)通報;2011年05期

4 周雙清;黃小龍;黃東益;胡新文;陳吉良;;Chelex-100快速提取放線菌DNA作為PCR擴(kuò)增模板[J];生物技術(shù)通報;2010年02期

5 唐蜀昆;姜怡;職曉陽;婁愷;李文均;徐麗華;;嗜鹽放線菌分離方法[J];微生物學(xué)通報;2007年02期

6 張玉琴,李文均,陳國忠,楊穎,田新朋;PCR法快速識別Actinobacteria的五種模板制備方法的比較[J];生物技術(shù);2004年05期

7 J.Neuzid ,陶紅 ,白秀峰;大環(huán)內(nèi)酯類抗生素的次級代謝酶類和生物合成[J];國外藥學(xué)(抗生素分冊);1987年06期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 馬永存;基于多種類型功能基因高通量篩選嗜鹽放線菌及潛力菌株的異源表達(dá)初探[D];云南大學(xué);2015年

2 賈鰻;艾丁湖地區(qū)高鹽環(huán)境放線菌物種資源的挖掘[D];云南大學(xué);2014年

3 陳超;新疆七角井鹽湖可培養(yǎng)細(xì)菌多樣性及其功能酶篩選[D];塔里木大學(xué);2011年

本文編號：2781731