【摘要】：家蠶核型多角體病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)可引發(fā)家蠶血液型膿病,給蠶業(yè)帶來嚴(yán)重?fù)p失。同時(shí),BmNPV也作為良好的外源基因表達(dá)材料應(yīng)用于現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究和生物技術(shù)等方面。BmNPV同源重復(fù)區(qū)hrs可以作為該病毒基因組復(fù)制的起點(diǎn),并且能夠作為增強(qiáng)子增強(qiáng)基因的表達(dá)效率,對BmNPV的增殖有著密切的關(guān)聯(lián)。囊膜糖蛋白GP64可識別細(xì)胞膜表面的受體,是病毒入侵宿主細(xì)胞所需的重要結(jié)構(gòu),對病毒在宿主體內(nèi)的傳播具有關(guān)鍵性作用。本研究通過對采集自廣西各蠶區(qū)的家蠶血液型膿病樣本,進(jìn)行BmNPV多角體的純化,提取其BmNPV病毒株的全基因組,并對基因組的同源重復(fù)區(qū)hr5和囊膜糖蛋白gp64基因進(jìn)行克隆,經(jīng)過測序和序列分析,結(jié)果顯示:1.本試驗(yàn)通過對19株廣西BmNPV病毒株hr5進(jìn)行克隆分析,結(jié)果發(fā)現(xiàn)廣西BmNPV病毒株的hr5核苷酸序列出現(xiàn)不同程度的變異,表現(xiàn)在由大片段的缺失和插入造成序列長度差別較大。這種差別不僅出現(xiàn)在不同毒株之間,而且同一毒株兩個(gè)目的序列也不盡相同。19個(gè)供試毒株的hr5大小在165-999 bp之間,其中,有10個(gè)毒株分別擴(kuò)增出兩個(gè)不同長度的/hr5,有2個(gè)毒株出現(xiàn)了整個(gè)同源重復(fù)序列的缺失,其他毒株也存在不同程度的回文片段缺失或增加。以此認(rèn)定hr5并非病毒復(fù)制的必需因子,但hrs不同的回文序列之間存在功能補(bǔ)償或相互替代作用,使病毒不僅能保持其基因的穩(wěn)定性,更能維持其對新環(huán)境適應(yīng)性能,這就是病毒在新老環(huán)境下皆能得以為繼與不斷適應(yīng)與生存的意義所在。2.通過對供試的18個(gè)BmNPV病毒株gp64基因的克隆。結(jié)果發(fā)現(xiàn),其中有2個(gè)毒株與T3株gp64基因ORF的長度一致,有2個(gè)毒株的gp64基因ORF在94-96位有3個(gè)核苷酸的缺失,有10個(gè)毒株的gp64基因ORF在97-102位上有6個(gè)核苷酸的插入。該突變位點(diǎn)位于GP64蛋白的N端信號肽序列,所缺失和插入的氨基酸均為疏水性氨基酸,該突變對相應(yīng)區(qū)域結(jié)構(gòu)或功能是否有影響還有待進(jìn)一步深入研究。3.依據(jù)與BmNPV病毒株gp64 ORF構(gòu)建的遺傳進(jìn)化樹比較,結(jié)果顯示區(qū)內(nèi)各分離毒株與國外的毒株不在同一亞群,說明gp64基因的遺傳具有地域特點(diǎn)。4.通過對供試BmNPV病毒株的gp64基因和hr5序列核苷酸序列同源性對比,發(fā)現(xiàn)gp64基因序列間的同源性在97.5%以上,而hr5序列的核苷酸同源性僅在66%以上。從此可以認(rèn)定結(jié)構(gòu)蛋白基因gp64更具保守性,而基因間區(qū)序列hr5則不然。
【學(xué)位授予單位】：廣西大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：S884.51
【圖文】：

歹丨刪亍邋ＰＣＲ邋擴(kuò)增時(shí)發(fā)現(xiàn)，ＧＸＨＪ、ＧＸＪＸ、ＧＸＬＹ、ＧＸＬＣ、ＧＸＮＭ、ＧＸＰＢ、ＧＸＸＤ、逡逑ＧＸＹＦ、ＧＸＹＪ和ＧＸＺＳ出現(xiàn)了兩個(gè)不同長度的片段，對兩個(gè)片段進(jìn)行克隆測序，逡逑它們的核苷酸序列皆符合同源重復(fù)區(qū)的特征。如圖３－３（Ａ）表示ＧＸＴＹ、ＣＸＣＷ、逡逑ＧＸＹＺ１、ＧＸＺＰ、ＧＸＲＸ、ＧＸＭＳ２的擴(kuò)增目的序列大小，圖３－３（Ｂ）表示ＧＸＬＹ逡逑株在擴(kuò)增時(shí)出現(xiàn)兩條目的條帶。逡逑２２逡逑

對目的條帶進(jìn)行純化后進(jìn)行序列克隆，對抽提的克隆質(zhì)粒進(jìn)行ＰＣＲ擴(kuò)增后，逡逑初步鑒定目的條帶成功得到克隆，并對質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切鑒定，最終確定了陽性克逡逑隆，如圖３－４表示ＧＸＬｅＹ－１和ＧＸＬｅＹ－２邋／Ｖ邋Ｉ邋／價(jià)ｍ／／邋Ｉ雙酶切電泳檢測圖。逡逑２３逡逑

分析ＢｍＮＰＶ病毒株各ＡｒＪ序列同源性，發(fā)現(xiàn)只有ＧＸＺＳ－１和ＧＸＮＮ、逡逑ＧＸＮＭ－１和ＧＸＺＰ、ＧＸＮＭ－２和ＧＸＴＹ之間的同源性達(dá)到了邋１００％，其他序列間逡逑的同源性在５２．５％以上。

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 余海鵬;李俊;張婷;陳濱;潘慧慧;全滟平;于威;;家蠶核型多角體病毒lef5基因?qū)Σ《净蚪M復(fù)制和轉(zhuǎn)錄調(diào)控的影響[J];蠶業(yè)科學(xué);2015年05期

2 陳濱;余海鵬;張媛媛;李俊;張婷;全滟平;于威;;家蠶核型多角體病毒凋亡抑制基因iap的功能分析[J];蠶業(yè)科學(xué);2015年05期

3 李賽男;楊凱;劉文華;趙海洲;;桿狀病毒Ac78 C末端保守區(qū)域的功能初步分析[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2015年07期

4 關(guān)洪鑫;李志勇;白銀梅;柳紀(jì)省;;家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)及其在口蹄疫疫苗研究中的應(yīng)用[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2013年09期

5 覃呂高;屈達(dá)才;李俊;徐周徐;;家蠶抗核型多角體病毒基因與蛋白的研究進(jìn)展[J];南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2013年05期

6 屈達(dá)才;;亞熱帶蠶絲產(chǎn)業(yè)種養(yǎng)技術(shù)模式的創(chuàng)新與發(fā)展思路[J];中國蠶業(yè);2010年04期

7 孟令英;繆成貴;杜則澎;蔡唯佳;許麗艷;李恩民;;NGAL基因新型TPA反應(yīng)元件結(jié)合蛋白的研究[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2008年06期

8 高博;鄧柳紅;易小平;肖蘇生;張春發(fā);;昆蟲桿狀病毒殺蟲劑研究與應(yīng)用綜述[J];現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技;2008年08期

9 季平,查新民,張國英,于繼彬,顧維,沈衛(wèi)德;異源多角體蛋白對家蠶核型多角體病毒粒子的包裝[J];微生物學(xué)報(bào);2002年01期

10 肖慶利,張志芳,易詠竹,何家祿,吳祥甫;家蠶核多角體病毒解旋酶基因啟動子及增強(qiáng)子hr3功能分析[J];生物化學(xué)與生物物理學(xué)報(bào);2001年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 梁湘;家蠶核型多角體病毒分子流行病學(xué)調(diào)查及宿主特異性研究[D];廣西大學(xué);2012年

2 劉惠芬;斜紋夜蛾核型多角體病毒Ⅱ型基因組DNA復(fù)制原點(diǎn)及ORF63基因分析[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

3 陳寅;桿狀病毒基因組掃描技術(shù)篩選病毒因子和順式元件及其表達(dá)系統(tǒng)的應(yīng)用[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 梁飛;BmNPV膜融合蛋白GP64作用機(jī)制初步研究[D];江蘇科技大學(xué);2016年

2 陳朝蓉;廣西家蠶血液型膿病毒株囊膜糖蛋白GP64基因克隆和序列分析[D];廣西大學(xué);2015年

3 朱中澤;家蠶桿狀病毒同源重復(fù)區(qū)hr3結(jié)構(gòu)與功能分析及不同轉(zhuǎn)移載體表達(dá)效率比較[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2002年

本文編號：2780033