【摘要】：目的本課題通過分析時間節(jié)律基因CLOCK、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1和細胞周期基因C-myc、CyclinD1、Wee1在白血病中的表達情況,研究該基因家族在白血病中的可能機制。通過分析節(jié)律基因Per2對耐藥的慢粒細胞株KCL22細胞的增殖、凋亡及分化的影響,進一步探討Per2基因在白血病耐藥過程中可能發(fā)揮的作用,從而為白血病的治療尋找新靶點。方法用qRT-PCR定量檢測30例CML、50例AML患者骨髓標(biāo)本和30例正常人外周血中節(jié)律基因CLOCK、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1和細胞周期基因Cmyc、CyclinD1、Wee1的mRNA的表達水平。構(gòu)建節(jié)律基因Per2過表達慢病毒,轉(zhuǎn)染慢粒細胞株KCL22細胞,并篩選穩(wěn)定株,通過CCK-8檢測KCL22細胞的增殖,流式細胞術(shù)檢測KCL22細胞凋亡、分化情況。結(jié)果與正常人相比,AML、CML患者中節(jié)律基因CLOCK與細胞周期基因Cmyc、CyclinD1表達升高,而節(jié)律基因Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1與細胞周期基因Wee1表達降低(P0.05);AML、CML中CLOCK、Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Wee1、C-myc、CyclinD1兩兩之間呈線性相關(guān)(P0.05)。其中AML中,Per1與Per2表達水平呈正相關(guān)(r=0.538,P0.01),Per1與Per3表達水平呈正相關(guān)(r=0.497,P0.01),Per2與Per3表達水平呈正相關(guān)(r=0.376,P0.05)。在CML中,Per1與Per2表達水平呈正相關(guān)(r=0.658,P0.01),Per1與Per3表達水平呈正相關(guān)(r=0.592,P0.01),Per2與Per3表達水平呈正相關(guān)(r=0.385,P0.05)。成功構(gòu)建了Per2過表達慢病毒,轉(zhuǎn)染慢粒細胞株KCL22細胞,并篩選到過表達Per2的KCL22/Per2穩(wěn)定株,將其作為實驗組。與對照組(KCL22/untreated)和空載組(KCL22/empty)比較,Per2過表達使KCL22細胞增殖受抑,細胞周期G1期細胞增多[實驗組(41.46±0.01)%,空載組(30.51±0.32)%,對照組(27.07±0.6)%,P0.05],對細胞凋亡無明顯影響[實驗組(7.63±0.12)%,空載組(7.98±0.21)%,對照組(8.33±0.01)%,P0.05]。結(jié)論CLOCK、C-myc、CyclinD1可能作為促癌因子發(fā)揮作用,Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Wee1可能作為抑癌因子發(fā)揮作用,并且這些節(jié)律基因之間相互作用,相互影響,共同調(diào)節(jié)人體內(nèi)的晝夜節(jié)律,進而影響腫瘤細胞增殖。其中,Per1、Per2、Per3在白血病的發(fā)生、發(fā)展中占重要地位。過表達的Per2能夠抑制慢性粒細胞KCL22細胞的生長和增殖,促使細胞周期阻滯于G1期,對細胞凋亡無明顯影響。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R733.7
【圖文】：

熒光顯微鏡下觀察的KCL22細胞株

Western-blot檢測Per2蛋白表達水平

實驗組細胞 G1 期所占比例升高（如表 14 和圖9，10 所示），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），提示 Per2 表達上調(diào)后，能促使慢粒細胞 KCL22 細胞周期阻滯于 G1 期。

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本文編號：2776464