【摘要】：本文的研究對象為毒死蜱的高效降解菌X1,分別通過電轉化法、CaCl2轉化法將含有LuxAB發(fā)光酶基因的質粒pTR102導入毒死蜱的高效降解菌株X1,研究了轉化子在不同類型、不同處理土壤中的存活狀況;對標記菌Lux-X1和出發(fā)菌X1降解毒死蜱及其產物TCP的特性進一步分析;深入探究了土壤非生物因子溫度、濕度對Lux-X1在土壤中的定殖動態(tài)、遷移分布的影響,研究結果歸納如下:1、降解菌X1菌株不僅對毒死蜱有高效的降解效果,對其產物3,5,6-TCP也有降解能力,在24h時對200mg/L的毒死蜱降解能力達到60.7%,對中間產物TCP的降解率可達69.3%。2、通過電轉化和CaCl2轉化法成功地將發(fā)光酶基因LuxAB導入降解菌X1中,即Lux-X1標記菌株。在暗室中觀察菌落發(fā)光活性,可得電轉化的成功率大于CaCl2轉化法,12次連續(xù)無抗性培養(yǎng)傳代,結果可知電轉化所得標記菌的遺傳穩(wěn)定性較CaCl2法所得穩(wěn)定。3、在不同時間內,標記菌Lux-X1與出發(fā)菌X1降解相同濃度毒死蜱的趨勢基本一致,當時間為72h時,毒死蜱的降解率分別為出發(fā)菌79.25%,電轉化的標記菌72.82%,CaCl2轉化的標記菌68.96%;同時對代謝產生20mg/L的TCP能降解完全。降解毒死蜱的能力有略微差異,外源性DNA轉入X1菌后對毒死蜱的降解能力影響不大,因此可以將Lux-Xl菌株釋放到土壤環(huán)境中進行檢測和進一步的修復研究。4、將標記菌Lux-Xl分別接種于砂土、黃褐土的滅菌和非滅菌土中,存活狀況如下:砂土黃褐土;滅菌土非滅菌土。整體規(guī)律為接菌后的前18d活菌數(shù)下降趨勢較快,之后緩慢減少趨于不變,質粒保留率在0-30d內逐漸降低,30d以后,質粒的變化趨勢較平緩,可見一個月的時間標記菌能適應環(huán)境,定殖其中。5、土柱分別于10℃、20℃、30℃恒溫培養(yǎng),在砂土和紅壤環(huán)境中,溫度越高,遷移速度越慢,隨著溫度的變化,標記菌Lux-Xl在10℃、20℃、30℃向下遷移速度依次遞減,而黃褐土環(huán)境下溫度增高,遷移速度增大,在10℃、20℃、30℃向下遷移速度依次遞增,因此不同類型的土壤,溫度對其中菌的遷移影響存在差異。6、土柱環(huán)境在30%WHC、60%WHC和100%WHC的情況下,標記菌Lux-Xl在砂土和黃褐土環(huán)境中,田間最大持水量的60%時,菌落移動的最快,遷移速度依次為60%WHC、30%WHC、100%WHC,而紅壤環(huán)境,在100%WHC、60%WHC、30%WHC遷移速度依次增大,三種不同類型的土壤,受濕度的影響有一定差異。同種環(huán)境狀況下,在相同溫度或濕度的情況下遷移速度砂土黃褐土紅壤。
【學位授予單位】：安徽農業(yè)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：X172;X592
【圖文】：

圖 1.1 毒死蜱的化學結構Fig. 1.1 Chemical structure of chlorpyrifos態(tài)毒性,5,6－三氯－2－吡啶醇，是毒死蜱和甲基毒

5,6-TCP 化學結構式Fig 1.2 Chemical structure of 3,5,6-TCP物降解的研究進展土壤中的降解除土壤本身理化性質，農因素的影響，這兩者在降解環(huán)境中相互影

X1 不僅能很好的降解毒死蜱，還能對其中間產物 TCP 達到降解效果。由圖，在 0-2h 期間，降解菌開始利用毒死蜱為其碳源，對毒死蜱有降解效果，但 生量很小，2-6h 時，降解速率明顯增強，毒死蜱的量在快速減少的同時 TCP也逐漸增加，6h 達到最大，6h 以后，毒死蜱和 TCP 成為 X1 菌共同的碳源和質，此時，利用毒死蜱的速率開始明顯降低，降解曲線呈緩慢下降，產生的 逐漸被 X1 菌降解，可以看出在 12h 時，利用 TCP 的速率減慢，相反毒死蜱的勢增大，24h 時，X1 菌對毒死蜱和 TCP 的降解率分別為 60.7%和 69.3%。

【參考文獻】

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本文編號：2769788