發(fā)布時(shí)間：2020-06-30 18:52

【摘要】：Periostin(POTSN),中文名為骨膜蛋白,之前又被稱(chēng)之為成骨細(xì)胞特異性因子2。POSTN最初從小鼠的成骨細(xì)胞克隆中得到,其參與細(xì)胞的募集、黏附和遷移等過(guò)程,是生物體中重要的細(xì)胞生長(zhǎng)因子。近來(lái)有研究顯示,POSTN在人卵巢中有較高的表達(dá)量,其對(duì)卵泡發(fā)育的調(diào)控起到一定的作用。Platelet-derived growth factor receptor-like(PDGFRL),因其所編碼的蛋白質(zhì)與PDGFR-β亞基的胞外結(jié)構(gòu)域顯著相似,故稱(chēng)為血小板衍生生長(zhǎng)因子受體樣蛋白。PDGFRL已被證實(shí)為腫瘤抑制基因,參與PDGF信號(hào)通路的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。本文主要以150日齡海蘭褐蛋雞為供試材料,采用半定量RT-PCR、免疫組化實(shí)驗(yàn)技術(shù)分別從mRNA水平和蛋白質(zhì)水平探究POSTN和PDGFRL基因在雞卵泡發(fā)育過(guò)程中的時(shí)空表達(dá)規(guī)律。并利用PCR-SSCP技術(shù)篩選大骨雞種群中兩個(gè)基因里與產(chǎn)蛋性狀關(guān)聯(lián)的潛在SNPs,以此期望發(fā)現(xiàn)與產(chǎn)蛋性能關(guān)聯(lián)的重要分子標(biāo)記。本研究的主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:(1)半定量RT-PCR實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:雞POSTN和PDGFRL基因mRNA在150日齡海蘭褐蛋雞各等級(jí)卵泡及卵巢間質(zhì)中均有較高水平的表達(dá),且表達(dá)水平有一定差異。POSTN基因在直徑為5-6 mm的前等級(jí)卵泡中表達(dá)量水平顯著高于F1(P㩳0.05),其他各等級(jí)卵泡間差異不顯著(P0.05)。這說(shuō)明雞POSTN基因主要在雞前等級(jí)卵泡的發(fā)育調(diào)控中起一定的作用,并且隨著卵泡等級(jí)分化表達(dá)量逐漸下降。而雞PDGFRL基因表達(dá)量水平隨著卵泡的發(fā)育先升高后下降,且在靠近卵泡等級(jí)化前后時(shí)期表達(dá)水平相對(duì)較高。其中,在F5中的表達(dá)量顯著高于卵巢間質(zhì)、4-5 mm、6-7 mm、F4、F2、F1(P㩳0.05),其他各等級(jí)卵泡間差異不顯著(P0.05)。這表明雞PDGFRL基因可能參與卵泡等級(jí)化發(fā)育生長(zhǎng)的調(diào)節(jié),并且可能參與卵泡等級(jí)化的維持。(2)免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:POSTN和PDGFRL蛋白質(zhì)分子主要在150日齡海蘭褐蛋雞直徑小于4 mm前等級(jí)卵泡的卵母細(xì)胞和間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá),而在膜層細(xì)胞中不表達(dá)。隨著卵泡的增大,POSTN蛋白質(zhì)在顆粒細(xì)胞中可以檢測(cè)到陽(yáng)性信號(hào),而PDGFRL蛋白質(zhì)分子在顆粒細(xì)胞細(xì)胞質(zhì)中檢測(cè)到微弱的陽(yáng)性信號(hào)。此結(jié)果說(shuō)明,雞POSTN和PDGFRL蛋白質(zhì)可能以自分泌或旁分泌的方式參與卵泡的生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控。(3)PCR-SSCP實(shí)驗(yàn)并關(guān)聯(lián)性狀分析結(jié)果顯示:在POSTN基因intron2上檢測(cè)到A2727T的轉(zhuǎn)換,根據(jù)該SNP位點(diǎn),將360只大骨雞分為AA和AB兩種基因型。其中AA型母雞在43、57和66周齡的產(chǎn)蛋量以及在30周齡時(shí)的蛋重都顯著高于AB型(P㩳0.05),且該SNP位點(diǎn)在這四個(gè)產(chǎn)蛋性狀中的加性遺傳方差百分比也相對(duì)較高。在PDGFRL基因exon2上檢測(cè)到G6761A和A6839G兩個(gè)關(guān)聯(lián)的SNPs的轉(zhuǎn)換。根據(jù)PDGFRL兩個(gè)關(guān)聯(lián)的SNPs,將樣本劃分為T(mén)T、TC和CC三種基因型。其中TT型母雞在57和66周齡的產(chǎn)蛋量顯著高于CC型的個(gè)體(P㩳0.05),而CC型的母雞在30和43周齡的體重和蛋重均顯著高于其他兩種基因型的個(gè)體(P㩳0.05),且這兩個(gè)關(guān)聯(lián)的SNP位點(diǎn)在這些產(chǎn)蛋性狀中的加性遺傳方差百分比也相對(duì)較高。根據(jù)所發(fā)現(xiàn)的3個(gè)SNPs組合可以得到5種基因型,其中AATT型母雞在43和66周齡時(shí)的產(chǎn)蛋量顯著高于其他四種基因型(P㩳0.05),并且AATT型母雞在30周齡的蛋重顯著高于其他四種基因型(P㩳0.05)。在今后的蛋雞育種工作中,此研究結(jié)果中所發(fā)現(xiàn)的3個(gè)SNPs可作為一個(gè)潛在的分子標(biāo)記應(yīng)用于產(chǎn)蛋性能的遺傳改良。
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：S831

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1 景洋;雞POSTN和PDGFRL基因在卵泡中的表達(dá)及其與產(chǎn)蛋性狀關(guān)聯(lián)分析[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2016年

本文編號(hào)：2735690