【摘要】：目的:已有大量研究表明,溫針灸治療腎陽虛證膝骨關(guān)節(jié)炎(KOA)具有獨(dú)特療效。本研究的主要目的是在中醫(yī)理論指導(dǎo)下,運(yùn)用基因芯片技術(shù),初步探討溫針灸療法治療腎陽虛證KOA在基因表達(dá)譜方面的分子生物學(xué)機(jī)制。方法:1.討論分析中西醫(yī)對KOA的認(rèn)識;探討KOA患者發(fā)病的分子機(jī)制,以及腎陽虛證KOA發(fā)病的中醫(yī)病因病機(jī)。2.溫針灸治療腎陽虛證KOA的臨床療效觀察:制定WOMAC疼痛量表和腎陽虛證量表,選取符合西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)的KOA,中醫(yī)辨證為腎陽虛證的患者30例,根據(jù)腎陽虛證KOA發(fā)病的病因病機(jī),以調(diào)節(jié)臟腑陰陽、溫補(bǔ)腎陽、疏通經(jīng)絡(luò)為主要治療原則,運(yùn)用中醫(yī)臟腑陰陽五行理論為指導(dǎo)選穴,用溫針灸治療兩個療程,共計(jì)10天,觀察溫針灸對腎陽虛證KOA的膝骨關(guān)節(jié)炎臨床療效和腎陽虛證的中醫(yī)證候療效。3.基因表達(dá)譜研究:采用基因芯片技術(shù),采集患者治療前后全血樣本,并選取膝骨關(guān)節(jié)炎臨床療效和中醫(yī)證候療效典型的腎陽虛證KOA10例全血標(biāo)本,同時選取正常健康人全血標(biāo)本3例,分別對腎陽虛證KOA溫針灸治療前和治療后、腎陰虛證KOA以及正常健康人作基因表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)分析研究,篩選差異表達(dá)基因。結(jié)果:1.目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對KOA的治療缺乏徹底治愈的有效手段。KOA發(fā)病主要見于中老年人,以腎陽虛證多見,中醫(yī)病因病機(jī)主要為:腎陽虛衰、外邪侵入、經(jīng)絡(luò)阻滯、臟腑氣機(jī)不利。溫針灸是治療腎陽虛證KOA的主要有效手段之一。2.對腎陽虛證KOA30例患者進(jìn)行溫針灸治療后,腎陽虛證KOA的膝骨關(guān)節(jié)炎臨床療效和腎陽虛證的中醫(yī)證候療效總有效率分別為93.33%、96.67%;WOMAC量表評分和腎陽虛證量表評分分析表明,腎陽虛證KOA患者治療后,評分均顯著降低(P0.01),療效顯著。整個治療過程,病人接受度高,無不良反應(yīng)。3.基因表達(dá)譜研究:(1)對腎陽虛證KOA治療前與健康對照組基因表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)對比分析,共篩選到差異表達(dá)基因98個,其中70個表達(dá)上調(diào),28個表達(dá)下調(diào)。差異基因GO富集分析主要涉及機(jī)體免疫應(yīng)答、生物學(xué)過程調(diào)節(jié)、細(xì)胞過程等;KEGG信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路分析篩選到21條信號通路,主要涉及自身免疫系統(tǒng)疾病、免疫功能等。(2)腎陽虛證KOA溫針灸治療后與治療前基因表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù)對比分析共篩選到52個表達(dá)下調(diào)基因,未篩選到表達(dá)上調(diào)基因。差異表達(dá)基因經(jīng)GO富集分析,主要涉及細(xì)胞過程、代謝過程、離子結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)活性等;KEGG信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路分析,主要涉及與衰老、代謝等相關(guān)信號通路,共計(jì)13條,包括p53信號通路、氮代謝信號通路等。結(jié)論:溫針灸是治療腎陽虛證KOA在基因表達(dá)譜方面的可能機(jī)制:第一,治療前,腎陽虛衰,患者免疫力低下,和健康人相比出現(xiàn)免疫相關(guān)基因的表達(dá)差異,治療后免疫力恢復(fù),免疫相關(guān)基因表達(dá)改善,因此治療后未能篩選到免疫相關(guān)基因;第二,腎陽虛衰可能影響到物質(zhì)運(yùn)輸、物質(zhì)代謝、能量代謝等,使物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)受阻、物質(zhì)代謝障礙、細(xì)胞能量匱乏,與之相關(guān)的基因表達(dá)通過負(fù)反饋調(diào)節(jié)處于一種異常增高的狀態(tài),通過溫針灸治療以后,當(dāng)腎陽虛證得到緩解的同時,相關(guān)基因的表達(dá)出現(xiàn)下調(diào);第三,治療前,因?yàn)殛枤獠蛔?外邪入侵,正氣奮起抗邪,處于正邪交爭的狀態(tài),致使一些基因表達(dá)增強(qiáng),當(dāng)通過溫針灸治療后,正氣恢復(fù),外邪祛除,基因表達(dá)恢復(fù)正常;第四,有研究表明膝骨關(guān)節(jié)存在骨組織的過度衰老和凋亡,溫針灸治療可能通過下調(diào)SIAH的表達(dá)抑制p53誘導(dǎo)的細(xì)胞過度凋亡,從而達(dá)到治療的作用。
【圖文】：

規(guī)格 掃描分辨率（μm） 掃描區(qū)間 tiff 染料通道1×244K2×105K4×44K8×15K5 Scan Area(61 x21.6mm)20 bit Green1×1M2×400K4×180K8×60K3 Scan Area(61 x21.6mm)20 bit Green3 芯片實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析3.1 原始數(shù)據(jù)的歸一化處理將實(shí)驗(yàn)得到的芯片原始數(shù)據(jù)由 R 軟件中 limma 包進(jìn)行歸一化處理，對歸一化的數(shù)據(jù)用箱線圖（Box plot）來觀察樣本數(shù)據(jù)分布的整體特征。如圖 1 所示：

圖 2 聚類分析圖3.2 火山圖結(jié)果分析火山圖(Volcano plot)通過芯片數(shù)據(jù)進(jìn)行組間比較，，篩選差異倍數(shù)（Foldchange 值）以及 t-檢驗(yàn)得到的 p-value 來確定顯著性差異的基因�；鹕綀D結(jié)果如圖 3 所示縱坐標(biāo)為-lg(P-value)值；橫坐標(biāo)為 log2(Fold Change)。正號（紅色）代表基因的上調(diào)，負(fù)號（藍(lán)色）代表基因的下調(diào)。X 軸平行線：p-value =0.05；Y 軸平行線：Fold Change=2。紅色點(diǎn)區(qū)域：p-value
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R246.9

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2696540