【摘要】：柑橘黃化脈明病毒(Citrus yellow vein clearing virus,CYVCV)是我國(guó)新近發(fā)現(xiàn)的危害檸檬的重要病毒,目前對(duì)其致病機(jī)制的研究較少。本研究以1年生檸檬實(shí)生苗為寄主植物,對(duì)嫁接接種CYVCV和模擬接種的檸檬植株葉片分別進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄組及小RNA測(cè)序,利用生物信息學(xué)技術(shù)挖掘CYVCV侵染誘導(dǎo)差異表達(dá)的基因和miRNA,研究這些基因和miRNA在檸檬應(yīng)答CYVCV脅迫中的功能。取得的研究結(jié)果如下:1.將接種后第30 d、60 d和90 d三個(gè)時(shí)間點(diǎn)收集的CYVCV侵染及對(duì)照檸檬植株葉片樣品分別進(jìn)行等量混合后進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測(cè)序。測(cè)序結(jié)果顯示,受CYVCV侵染的檸檬樣品中有679個(gè)基因上調(diào)表達(dá),637個(gè)基因下調(diào)表達(dá),這些基因中分別有1114個(gè)和453個(gè)注釋到GO功能和KEGG通路。GO功能主要集中在生物學(xué)過(guò)程和分子功能,其中細(xì)胞間信息傳遞、氧化還原過(guò)程、對(duì)真菌的防御反應(yīng)、酶激活和酶抑制等功能富集最為顯著。KEGG通路主要集中在代謝通路,其中光合作用、葉綠素生物合成與代謝、碳代謝和光合作用中的碳固定途徑富集最為顯著,共包含68個(gè)差異表達(dá)基因,推測(cè)這些代謝途徑的基因表達(dá)量變化可能與檸檬受CYVCV侵染后葉片表現(xiàn)的葉片褪綠及黃化等癥狀相關(guān)。2.選取與光合作用、葉綠素生物合成與代謝以及碳代謝等通路相關(guān)的16個(gè)差異表達(dá)基因進(jìn)行qRT-PCR分析,結(jié)果顯示這些基因存在時(shí)間動(dòng)態(tài)變化,其中有6個(gè)基因?yàn)橄认抡{(diào)后上調(diào)表達(dá),4個(gè)為先上調(diào)后下調(diào)表達(dá)。同時(shí)選取5個(gè)AGO同源基因和3個(gè)DCL同源基因進(jìn)行qRT-PCR分析,結(jié)果顯示有7個(gè)基因存在差異表達(dá)變化。分析這些基因的時(shí)間動(dòng)態(tài)變化發(fā)現(xiàn)多數(shù)基因在第60 d的表達(dá)量變化明顯與30 d和90 d不同。根據(jù)qRT-PCR結(jié)果篩選出6個(gè)差異顯著的基因,分析其在CYVCV侵染的甜橙和小h久手倉(cāng)曛斜澩锪勘浠，

本文編號(hào)：2683276