【摘要】：第一部分人血脂水平與LIPC基因單核苷酸多態(tài)性關(guān)系的Meta分析目的:肝脂酶(Hepatic lipase,LIPC,HL)是脂蛋白代謝中的關(guān)鍵酶。在低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)顆粒的重塑以及殘余脂蛋白分解代謝中,肝脂酶發(fā)揮關(guān)鍵作用,與血脂異常以及動(dòng)脈粥樣硬化等疾病密切相關(guān)。我們基于肝脂酶中啟動(dòng)子區(qū)兩個(gè)單核苷酸(rs1800588,rs2070895)多態(tài)性(SNPs)對(duì)人血脂水平的影響的文獻(xiàn)報(bào)道,整合已經(jīng)發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)中不同人群亞種的肝脂酶基因單核苷酸多態(tài)性和血脂水平關(guān)系的數(shù)據(jù),對(duì)不同人群亞種的血脂數(shù)據(jù)進(jìn)行Meta分析,研究肝脂酶啟動(dòng)子單核苷酸多態(tài)性對(duì)人血脂水平的影響。方法:系統(tǒng)檢索 Web of Science,Pub Med,The Cochrane Library(Cochrane Database of Systematic Reviews)and The Cochrane Central Register of Controlled Trials(CEN TRAL),MEDLINE,EMBASE,以及萬(wàn)方數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)知網(wǎng)、中國(guó)生物醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)庫(kù)等數(shù)據(jù)庫(kù)。進(jìn)行本課題相關(guān)中英文文獻(xiàn)的檢索。所有研究項(xiàng)目的時(shí)間范圍自建庫(kù)至2017年10月。并篩選相關(guān)文章。兩位研究員獨(dú)立篩選文獻(xiàn)、評(píng)估文獻(xiàn)質(zhì)量,如果出現(xiàn)兩位研究員意見(jiàn)不一致的情況,要求兩名研究員經(jīng)過(guò)深入的討論解決分歧;仍然意見(jiàn)不統(tǒng)一,則需要將存在的問(wèn)題給其他作者或通訊作者進(jìn)行確認(rèn),以便決定最終可納入Meta分析的研究。使用NOS量表進(jìn)行文獻(xiàn)的質(zhì)量評(píng)價(jià)。本文采用統(tǒng)計(jì)軟件stata 12.0進(jìn)行Meta分析。加權(quán)平均差(WMD)和95%的可信區(qū)間(CI)通過(guò)隨機(jī)效應(yīng)模型來(lái)探討肝脂酶啟動(dòng)子單核苷酸多態(tài)性與人血脂水平變化的關(guān)系。通過(guò)敏感性分析考察結(jié)果是否穩(wěn)定、Begg秩相關(guān)法評(píng)價(jià)發(fā)表偏倚。結(jié)果:在互聯(lián)網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)中合理搜索后共發(fā)現(xiàn)1552篇論文,127篇論文中報(bào)道了LIPC的不同種類的SNPs多態(tài)性。其中,多數(shù)研究和討論的是SNPs(rs1800588和rs2070895)。在文獻(xiàn)的篩除與保留上制定了篩除和納入標(biāo)準(zhǔn),所有文獻(xiàn)經(jīng)過(guò)初步的去除重復(fù)步驟后,剩余87篇,研究中包括每種LIPC基因多態(tài)性的血脂分布的檢測(cè),所選的17篇論文中有24946例帶有G-250A的參與者,72篇論文中有76757例帶有C-514T(-480T)。將上述論文研究中初始的患者分組分為AA+AG/GG,GG/GA/AA,TT+TC/CC,CC/CT/TT。并在每組內(nèi)各兩種基因型之間進(jìn)行進(jìn)一步的Meta分析。1.對(duì)于G-250A血脂水平的差異評(píng)估:AA基因型者血漿HDL-C水平比GG基因型者顯著更高。在其它基因型比較中,所有突變基因型的受試者血漿HDL-C水平均高于野生型受試者。AA基因型平均血漿TC水平比GG基因型更高。攜帶A的平均血漿TG水平比非攜帶者更高。2.對(duì)于C-514T血脂水平的差異評(píng)估:突變TT的血漿HDL-C 水平較CC基因型者更高。TT基因型的TC和TG 水平較CC基因型均更高。3.性別亞組分析:C-514T受試者中,所有突變基因型亞組中男性的HDL-C水平較女性顯著升高。4.種族亞組分析:G-250A受試者中,所有突變基因型亞組中白人的HDL-C水平顯著更高;C-514T受試者中,CT/CC突變基因型亞組中白人的TC和TG水平顯著更高。結(jié)論:通過(guò)Meta分析,我們發(fā)現(xiàn)1.LIPC啟動(dòng)子基因C-514T和G-250A多態(tài)性對(duì)人體中HDL-C的水平有影響。2.LIPC啟動(dòng)子基因C-514T和G-250A多態(tài)性可能與原發(fā)性高脂血癥相關(guān)。第二部分miR-152對(duì)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化影響的機(jī)制研究背景:動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是心血管事件發(fā)生發(fā)展的主要病理基礎(chǔ),其發(fā)病機(jī)制目前仍不明確�，F(xiàn)有的研究普遍認(rèn)為AS是一種慢性血管炎癥性疾病[1]。與正常人相比,miR-152在AS患者的血清樣品中下調(diào),表明miR-152在動(dòng)脈粥樣硬化形成中發(fā)揮作用[2]。然而,miR-152在巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的功能仍未得到探索。Kruppel-like factor(KLF)是真核生物中一類具有鋅指結(jié)構(gòu)的轉(zhuǎn)錄因子,對(duì)于促進(jìn)生長(zhǎng)基因族和抑制分化基因族有重要作用。其功能主要參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、增殖和最終的細(xì)胞凋亡等過(guò)程。目前研究發(fā)現(xiàn)其中的KLF5在早期胚胎發(fā)育、癌癥發(fā)生等生理病理過(guò)程中發(fā)揮作用,并且在平滑肌、內(nèi)皮和上皮中均有表達(dá),特別是在血管重塑中起重要的生理作用。生物信息學(xué)研究表明KLF5是miR-152的直接作用靶點(diǎn)。典型Wnt/β-catenin 信號(hào)通路(Canonical Wnt/β-cateninpathway)能激活核內(nèi)靶基因的表達(dá),在多細(xì)胞生物體軸分化過(guò)程中起重要作用[3,4]。最近,有大量證據(jù)表明β-catenin參與了 AS的發(fā)病機(jī)制[5,6]。當(dāng)Wnt/β-catenin信號(hào)通路被異常激活后,可引起β-catenin異常表達(dá),進(jìn)而導(dǎo)致下游基因的異常表達(dá),使細(xì)胞發(fā)生異常增殖和分化,最終導(dǎo)致疾病的發(fā)生。因此,在此基礎(chǔ)上,我們假設(shè),miR-152可能是通過(guò)靶向作用于KLF5,調(diào)節(jié)KLF5的表達(dá),影響細(xì)胞凋亡和炎癥反應(yīng)來(lái)最終影響AS的發(fā)生發(fā)展,其中可能涉及Wnt/β-catenin信號(hào)通路。通過(guò)該研究,我們期望能闡明miR-152/KLF5在動(dòng)脈粥樣硬化形成中的可能作用和機(jī)制,以提供未來(lái)將miR-152/KLF5作為AS治療靶點(diǎn)的可能性。研究目的:研究miR-152/KLF5在巨噬細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的作用和機(jī)制。探索miR-152通過(guò)KLF5調(diào)控β-catenin(β-catenin)信號(hào)通路,調(diào)節(jié)動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的可能機(jī)制。研究方法:首先,構(gòu)建AS模型小鼠,與對(duì)照小鼠進(jìn)行比較。通過(guò)HE染色比較對(duì)照組和模型組小鼠主動(dòng)脈的病變特征。通過(guò)蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot)檢測(cè)鋅指蛋白轉(zhuǎn)錄因子5(KLF5)在對(duì)照組和模型組小鼠主動(dòng)脈中的表達(dá)。qRT-PCR檢測(cè)對(duì)照組和模型組小鼠主動(dòng)脈中miR-152的表達(dá)。通過(guò)Western Blot檢測(cè)對(duì)照組和模型小鼠主動(dòng)脈標(biāo)本中細(xì)胞凋亡相關(guān)基因--半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B淋巴細(xì)胞瘤-2蛋白(B-cell lymphoma-2,BCL-2)和BCL-2相關(guān)X蛋白(BAX)的蛋白表達(dá)水平。檢測(cè)AS小鼠血中炎癥因子水平和血脂水平,比較模型組和對(duì)照組的區(qū)別。通過(guò)Western Blot檢測(cè)正常組和模型組小鼠Wnt/β-catenin信號(hào)通路變化情況,明確miR-152通過(guò)KLF5調(diào)節(jié)動(dòng)脈粥樣硬化的作用機(jī)制。小鼠巨噬細(xì)胞用ox-LDL處理的RAW264.7細(xì)胞用作細(xì)胞模型。通過(guò)功能獲得和功能喪失實(shí)驗(yàn)研究了miR-152在RAW264.7細(xì)胞炎癥反應(yīng)中的功能。研究結(jié)果:1.構(gòu)建AS模型小鼠,與對(duì)照組小鼠相比,模型組小鼠實(shí)驗(yàn)后體重明顯增加。主動(dòng)脈HE染色結(jié)果顯示對(duì)照組染色正常,模型組呈明顯AS病變特征。2.與對(duì)照組小鼠相比,模型組小鼠血中炎癥因子(IL-1,IL-6,TNF-a)水平均明顯上升。血脂水平結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組TC,LDL明顯上升,TG變化不大,HDL明顯下降。3.免疫組化(immunohistochemistry,IHC)結(jié)果顯示模型組小鼠主動(dòng)脈的KLF5表達(dá)水平較對(duì)照組明顯升高。蛋白質(zhì)免疫印跡(Western Blot,WB)結(jié)果也發(fā)現(xiàn)KLF5在模型組中高表達(dá)。凋亡調(diào)控基因檢測(cè)結(jié)果顯示模型組小鼠主動(dòng)脈中Caspase-3和BAX高表達(dá),BCL-2低表達(dá)。4.模型組小鼠和正常小鼠對(duì)比,檢測(cè)β-catenin信號(hào)通路(包括β-catenin,APC,GSK,AXIN,DSH等)變化情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組β-catenin蛋白表達(dá)水平升高,其它沒(méi)有變化。5、與對(duì)照組小鼠相比,模型組小鼠主動(dòng)脈中miR-152表達(dá)水平下降。6、miR-152的上調(diào)顯著降低了小鼠RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)上清液中ox-LDL介導(dǎo)的IL-1,IL-6和TNF-α的升高表達(dá),并降低了β-連環(huán)蛋白的表達(dá),而這些作用是在miR-152上調(diào)的基礎(chǔ)上,KLF5被下調(diào)導(dǎo)致的。研究結(jié)論:miR-152可能通過(guò)下調(diào)KLF5和降低β-catenin的表達(dá)來(lái)阻止AS的進(jìn)展。miR-152/KLF5可能用作AS治療和診斷的標(biāo)志物。
【圖文】：

第一部分 人血脂水平與 LIPC 基因單核苷酸多態(tài)性關(guān)系的 Meta 分析粥樣硬化鈣化的進(jìn)展[13-15]�；颊呷狈Ω沃久笗r(shí)，其血漿中含有的膽固醇和甘油三酯的加，從而引起動(dòng)脈粥樣硬化出現(xiàn)過(guò)早，而血漿肝脂肪酶活性基因發(fā)生變異會(huì)導(dǎo)致降低，其結(jié)果是增加 HDLC 濃度，引起患性的降低[15]。大多數(shù)實(shí)驗(yàn)顯示高肝脂肪酶對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化有促進(jìn)作用。因中既可以發(fā)揮脂肪酶的作用，又可以當(dāng)作配體參與脂蛋白的的研究還難以判斷出，它的多個(gè)作用中的哪一種在生理上對(duì)重要。來(lái)說(shuō)，肝脂肪酶在抗動(dòng)脈粥樣硬化的脂蛋白的代謝與重塑中肝脂酶缺乏的個(gè)體患者中，都存在血漿膽固醇和甘油三酯濃外，，肝脂肪酶缺乏是相對(duì)罕見(jiàn)的 LIPC 突變的結(jié)果，其導(dǎo)致循（由于分泌減少或酶失活），并且導(dǎo)致富含 TG 的 HDL 和 V以及冠心病風(fēng)險(xiǎn)增加[16, 17]。

動(dòng)子 514 位置上的 T 等位基因與低肝脂酶的活性，高濃度的 HDL-C，更大 微粒相關(guān)。經(jīng)證明肝脂酶（LIPC，HL）基因中的 SNPs 與血脂濃度相關(guān)并增[29,30]。常的單核苷酸多態(tài)性（SNPs）具有多種功能。LIPC 基因中的單核SNPs）可能與 HDL 膽固醇血漿水平升高或降低以及不同的冠心病[31,32]。因此，獨(dú)特的單核苷酸多態(tài)性（SNPs）可因此賦予促動(dòng)脈動(dòng)脈粥樣硬化的不同的表型的后果。 這可以解釋為什么更大和更有觀察到 LIPC 突變和冠心病風(fēng)險(xiǎn)之間的關(guān)聯(lián)[33]。多變的表型可次要因素，如環(huán)境，生活方式和激素水平導(dǎo)致的[34]。但主要取決態(tài)性（SNPs）對(duì) HL 活性的功能影響。LIPC 基因中的單核苷酸s）可直接影響 HL 的 TG 水解能力，并可通過(guò)影響 HDL 的代謝及 HL 功能的能力間接影響 HL。IPC 基因中的突變可能對(duì) HL 功能具有直接影響，或者可能通過(guò)導(dǎo)少或功能障礙而間接影響脂解作用，HDL 產(chǎn)生的興奮劑可以通過(guò)
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R543.5

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本文編號(hào)：2636282